刘育昆 邹登朗 祁得胜 刘忠浩 都玉蓉 马建滨

(青海师范大学生命科学学院，青海省青藏高原生物多样性形成机制与综合利用重点实验室，西宁，810008)

细胞永生化是指体外培养的细胞经过自发的或受外界因素的影响从增殖衰老危机中逃离，从而具有无限增殖能力的过程。而永生化自发发生的概率极低，啮齿类动物自发性永生化自发发生的概率为10-6—10-5，而人类细胞永生化自发发生的概率则小于10-12[1]。正常情况下在体外条件下培育的细胞可以产生有限次数的增殖以及传代，但经过有限次数增殖和传代后，细胞就会停止增殖并发生衰老灭亡，这种情况限制了有关细胞培养实验的继续进行，研究者通过基因转染等技术将外源性永生化基因导入目的细胞中，使永生化基因在靶细胞基因组中整合并表达，建立永生化细胞系。目前研究显示端粒的长度以及端粒酶的活性与细胞永生化的关联较密切。研究者对细胞永生化发生机制的研究获得了较大进展，本文在细胞永生化基本原理的基础上，对细胞永生化方法进行概述。

1 细胞永生化原理

人的正常细胞在体外培养并分裂一段时间后会进入衰老期(M1期)。除干细胞、生殖细胞外，大部分真核生物细胞都具有该特性。例如人上皮细胞在分裂40至60代后就会停止生长，产生DNA合成蛋白抑制因子，保证DNA复制和染色体分配质量的检查机制就会发送细胞周期停止信号，阻止DNA合成，细胞不再分裂并开始衰老，而病毒、原癌基因和抑癌基因突变体等则可越过衰老期而进入增长抑制状态，即危机期(M2期)。……