魏 涛，冯连杰，付小娜，赵世杰，刘伟鹏，梁 豪

乳腺癌患者的死亡多由局部肿瘤转移引起［1］，在肿瘤转移过程中，侵袭性癌细胞的增殖程序受基因的调控［2］。miRNA 是一类内源性非编码小RNA，可通过与靶基因结合，调控蛋白的表达和细胞功能。已有研究发现，miR-452-5p 可抑制乳腺癌细胞转移［3］，miR-485-5p 通过靶向survivin 抑制乳腺癌的进展和化学敏感性［4］。在细胞中，小RNA 通过与靶基因的3'-未翻译区互补结合抑制基因表达，研究显示，miR-146a-5p 通过调控SOX5 的表达影响三阴性乳腺癌细胞的增殖和转移［5］。SOX5 作为癌基因发挥作用，抑制SOX5 的表达可抑制非小细胞肺癌和前列腺癌的发展［6，7］。SOX5 被证明是由多个小RNA 调控的，但在乳腺癌中，miR-452-5p 是否调控SOX5 还没有研究。笔者通过检测miR-452-5p、SOX5 的表达，探讨miR-452-5p 对乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响。

1 材料与方法

1.1 材料人乳腺上皮细胞株HBL-100、人乳腺癌MCF-7、SKBR-3、BT549 细胞株（上海细胞库）；胎牛血清、RPMI 1640 培养基（美国Gibco 公司）；Tranwell 小室（美国Millipore 公司）；Matrigel 胶（美国BD 公司）；MTT、DMSO（美国Sigma 公司）；miRcon、miR-con mimic 的构建（上海吉凯基因公司）；SOX5、Cyclin D1、CDK4、MMP-2、MMP-9 一抗（美国Abcam 公 司）；Twist、N-cadherin、Vimentin、βactin 抗体（美国CST 公司）；lipofectamine TM2000转染试剂（美国invitrogen 公司）；SOX5 过表达载体及空载体、SOX5 野生型（WT）或突变型（MUT）荧光素酶报告载体（广州复能基因有限公司）；miR-452-5p、SOX5 引物（上海生工公司）；IgG 二抗（北京博奥森生物科技有限公司）；RIPA 裂解液、BCA 蛋白检测试剂盒（美国Thermo scientificals 公司）；酶标仪购自Bio-Red 公司；电子荧光显微镜购自日本Olympus 公司；Western blot 发光成像系统（美国UVP公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞的培养与分组 HBL-100、MCF-7、SKBR-3、BT549 细胞置于含10%胎牛血清的RPMI 1640 培养基中，置于37 ℃、5%CO2培养箱中培养。实验首先分为空白对照组（NC），阴性对照组（miRcon），miR-452-5p 过表达组（miR-452-5p mimic）；miR-con 组：将miR-con 转染至SKBR-3 细胞中；……