王平，刘洋，黄伟，刘传炯

(1.四川省林业科学研究院，成都610081；2.画稿溪国家级自然保护区管理处，四川泸州646405)

2020年4月，在四川泸州画稿溪国家级自然保护区内海拔660 m的溪流附近，采集到4号(标本号:HGX2020022～HGX2020025)角蟾科Megophryidae标本(图1)，周围环境为苦竹Pleioblastusamarus与落叶阔叶混交林，微生境为流水崖壁下、石下以及有流水的草本植物丛中。结合分子系统发育重建及形态比较，确定该4号标本为角蟾科掌突蟾属Leptobrachella的毕节掌突蟾Leptobrachellabijie，系四川省两栖类新记录种。

1 方法

根据费梁和叶昌媛(2001)的测量方法，对4号标本进行了测量与记录，其他物种的形态数据来自Wang等(2019)。

将其中2号标本利用OMEGA试剂盒提取DNA，利用引物L3957/H4551(Simonetal.，1994)扩增16SrDNA基因序列。扩增体系为25 μL，95 ℃ 5 min；94 ℃ 40 s，53 ℃ 40 s，72 ℃ 1 min，35个循环；72 ℃ 7 min，10 ℃结束。扩增产物送苏州金唯智公司测序，利用LaserGene.v7.1(DNASTAR Inc.，美国)及MEGA 7(Kumaretal.，2016)对获得的序列进行处理。基于测序获得的序列片段、在NCBI上下载的部分掌突蟾属物种以及外群东方锄足蟾Pelobatessyriacus、摩洛哥锄足蟾Pelobatesvaraldii序列，利用MrBayes 3.2.2(Ronquistetal.，2012)，最佳进化模型为GTR+I+G，由Partitionfinder 2.1.1基于Akaike Information Criterion (AIC)计算所得，及RaxmlGUI 1.5(Silvestro &Michalak，2012)，模型为GTRGAMMA，bootstrap设为1 000，其他参数保持默认，分别重建所采集标本的贝叶斯法和最大似然法系统发育关系树。同时利用MEGA 7计算物种及种群间的遗传距离，使用模型为Kimura 2-parameter，其他参数保持默认。

2 结果

4号标本体长为30.5～33.6 mm；背部棕褐色，具小疣粒；体侧具稀疏的不规则黑斑点；腿及前臂背面具3～4条褐色横纹；前后肢腹面紫黑色，具较密集的不规则灰白色斑点；腹部白色，具淡灰色斑点；腋腺白色；指间无蹼，趾间微蹼。

获得2条16SrDNA碱基序列，长度为564 bp。重建的贝叶斯系统发育树和最大似然树一致显示，该4号标本与毕节掌突蟾的模式标本聚为一支(图2)，并享有0.7%的遗传距离。……