徐淑菲，林双庆，陈信忠，刘启霖，蔡绍鑫，曾韵颖，朱黄鑫，方成俊，孔凡德

（1.厦门海关技术中心，福建厦门 361026；2.东山海关综合技术服务中心，福建东山 363401；3.厦门海关，福建厦门 361000）

罗非鱼是全球第二大重要的养殖鱼类。我国为世界第一罗非鱼养殖大国，养殖产量约占世界总产量的50%，主要集中于广东、广西、海南和福建等地，以出口为主。2009 年夏天，以色列某养殖场罗非鱼突然大量死亡，同年，自然生长的野生罗非鱼也出现大量死亡。经证明，死亡鱼感染了罗湖病毒（tilapia lake virus，TiLV）。随后，厄瓜多尔、埃及、马来西亚、哥伦比亚、泰国、印度以及中国台湾等相继发现TiLV 感染病例[1-6]。2017 年雷燕等[7]研究报告称，从海南省养殖的罗非鱼中检测出TiLV。2019 年雷燕等[8]再次研究称，从广东、海南、福建等省的罗非鱼样品中均检出TiLV。然而，官方和其他研究团队目前均未有我国检出TiLV 的报道。

LAMP 技术即环介导的等温扩增技术（loopmediated isothermal amplification，LAMP），由于不需要PCR 仪和昂贵的试剂，目前已被广泛应用于肿瘤筛选、植物病毒检测、转基因食品检测、动物胚胎性别鉴定、水生陆生动物的细菌性及病毒性疫病检测等方面[9-10]。与普通PCR、荧光定量PCR相比，LAMP 优点突出，具有效率高、特异性好、肉眼可观察结果等特点。

目前，世界动物卫生组织（OIE）和我国尚未将TiLV 列入检疫名录，也无相应检测标准。因此，建立TiLV 检测方法，对于了解国内TiLV 的流行病学，建立对应的检测标准具有重要意义。TiLV为分段、单链的负链RNA 病毒，由10 个基因片段组成。本研究根据编码RNA 聚合酶的片段1，设计LAMP 引物，采用Genie II 等温扩增荧光检测系统，应用等温扩增技术原理，结合荧光检测技术，建立了检测TiLV 的RT-LAMP 方法。……