张丽娇 雷敏 刘宁 侯冰 郭铜 薛思明

（长春师范大学生命科学学院 130032）

在人类中，非结核分枝杆菌（NTM）是一个重要的临床问题，与显著的发病率有关，其发生率在全世界范围内都在增加[1]。CD4+T 细胞的免疫作用在分枝杆菌感染中起至关重要的作用。结核分枝杆菌感染巨噬细胞，MHC 分子负责将菌体抗原递呈，CD4+T 细胞接收信息，相关的细胞因子IFN-γ、TNF-α 大量分泌[2-4]。而有研究表明，CD8+T 细胞在被菌体感染后也会出现IFN-γ 等细胞因子，CD8+T 细胞的免疫作用在菌体感染中也不容忽视[5-7]。有必要进一步研究CD4+、CD8+T 细胞在NTM 感染过程中的功能。本实验从牛颌下腺淋巴结中分离出一种胞内分枝杆菌，旨在比较胞内分枝杆菌与BCG 菌株的感染特性和宿主免疫机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料、试剂

C57BL/6 小鼠，雌性，4 周龄，北京华阜康生物科技股份有限公司；TNF-α、IFN-γ、IL-10、IL-12 的ELISA 检测试剂盒，R&D 公司；BCG 菌株、胞内分枝杆菌，由吉林农业大学免疫与微生物实验室提供；胶原酶XI，Sigma 公司；7H9 培养基、CD3 抗体 (Rat Anti-Mouse)、CD4 抗体 (Rat Anti-Mouse)、CD8 抗体(Rat Anti-Mouse)、BD 公司。

1.2 实验方法

1.2.1 胞内分枝杆菌在小鼠肺内的增殖

用对照菌株BCG 和分离的胞内分枝杆菌腹腔感染小鼠（1×106菌体/小鼠）。感染过程设15、30、45 和60d 4 个检测时间段，并设空白对照组。每个时间点共有5 只动物受到感染。通过用稀释的肺脏匀浆在7H9 培养基上检测细菌增殖率。

1.2.2 流式细胞术检测小鼠肺CD3+CD4+、CD3+CD8+T 细胞的变化

肺组织用胶原酶XI 消化，得到肺单细胞悬液[8-9]。细胞（1×105/管）在4℃条件下用分别用CD3 抗体、CD4 抗体、CD8 抗体单克隆抗体孵育20min[10]。流式细胞术分别检测染菌后15、30、45 和60d CD3+CD4+、CD3+CD8+T 细胞比例。

1.2.3 Elisa 法检测血清中IFN-γ、TNF-α、IL-12、IL-10 的表达