顾丛丛

（山东省桓台县畜牧渔业服务中心 256400）

1 材料

1.1 采样用品

磷酸盐缓冲保护液（含有30%甘油和10%双抗）、一次性使用灭菌棉拭子、75%酒精、1.5ml EP 管、EDTAk2 无菌抗凝管、记号笔、冰袋、封口袋、剪刀、记号笔、防护服、口罩、防护帽、手套等。

1.2 主要试剂和仪器

病毒DNA/RNA 提取试剂盒（4.0），西安天龙科技有限公司生产。非洲猪瘟病毒荧光PCR 检测试剂盒，本试剂盒采用Taqman 探针实时荧光聚合酶链式反应（Real time PCR），对非洲猪瘟病毒核酸进行定性或定量检测，深圳真瑞生物科技有限公司生产。全自动核酸提取仪是西安天龙科技有限公司生产的NP968 -C，荧 光 定 量 PCR 仪 器 是 Applied Biosystems QuantStudio 3，生物安全柜是Thermo Fisher Scientific Model 1389。

2 采样

2.1 采样依据

本次采样主要根据《2020 年淄博市非洲猪瘟监测实施方案》 《关于加强病死猪无害化处理环节非洲猪瘟风险管控的通知》 《2020 年桓台县县级动物疫病监测方案》 等。

2.2 样品要求

固体环境样品应放置在加有PH7.2 PBS 的1.5ml EP 管中，液体样品直接放在1.5ml EP 管中，不得少于1ml/管。每头猪的样品应单独包装、编号，同一场点的样品应再加外包装，防止渗漏，样品运输过程中应尽量保持低温。

每家养猪场户采集两栏猪舍的样品，包括猪粪：四角及中心位置每栏采集5 份拭子，放入1 个采样管中；污水：每栏采集1 份，不低于1ml/份；眼鼻拭子、肛门拭子：每栏采集2 头猪的拭子，同一头猪的眼鼻拭子、肛门拭子放入同一个EP 管中。病死猪的样品采集肛门拭子放入EP 管中，抗凝血样品主要采集了两家养殖场，每家养猪场户采集30 份抗凝血，每头猪不少于5ml/管。

2.3 样品采集

本次样品采集针对县域内的生猪养殖场户，从2020 年1～12 月，连续监测12 个月。……