孙竹林 姬 曼 赵君朋

(首都医科大学中心实验室电镜室，北京 100069)

透射电镜(Transmission Electron Microscopy TEM)是生命科学领域超微形态学研究的重要手段。TEM生物样品制备过程复杂且步骤繁多，因此样品制备对实验的成败至关重要。其中离散细胞样品(如血液，胸腹水样本等)因其细胞数量少、且相对分散，这类样品的收集制备一直是个难题[1-3]。以往，离散细胞样品通常采用离心沉淀法先将细胞悬浮后离心，积聚成团块再进行常规电镜制备[1]。此方法一般要求有足够的细胞数量，细胞离心后易成团且比较牢固，不然制备过程中经多次换液、离心处理后很难得到足量细胞样品，最终导致制样无预期结果[1-4]。有研究用明胶预包埋法处理离散细胞样品，但该方法的明胶温度难以控制，容易造成细胞变形等问题[2-4]。本研究采用天然蛋白胶体(蛋清)对离散细胞样品进行预包埋处理，既易保存样品原有数量，又不影响固定包埋效果。

1 材料和方法

1.1 材料

试剂：2.5%戊二醛；1%锇酸；0.1mol/L 磷酸缓冲液；spon812树脂；乙醇；环氧丙烷。

仪器：透射电子显微镜1400Plus；超薄切片机UC6；全自动组织处理机EM TP；烤片台；烤箱。

1.2 方法

1.2.1细胞的收集

分别取大鼠骨髓全血和血管平滑肌细胞悬液各1.5mL入尖底离心管，离心15min(1500转/min)弃上清。

1.2.2固定与漂洗

加2.5%戊二醛固定液(4℃预冷)固定1h。适量0.1mol/L 磷酸缓冲液漂洗3次，每次5min。

1.2.3预包埋

首先将已处理的细胞团吸取至滤纸上吸干水分，随后取新鲜鸡蛋开小孔，吸取适量蛋白(蛋清),滴于预热的载玻片表面(约50μL/滴)，待蛋白微凝时(呈灰白色)，将细胞转移至蛋白凝块，使其包埋于其中，再次将载玻片置烤片台上加热至蛋白完全凝固状态(呈白色)。……