马 凤

（甘肃省靖远县畜牧兽医技术服务中心，甘肃靖远 730900）

近些年来，肺炎克雷伯菌逐渐在羊身上被发现，发展速度较快，对羊养殖产生了重要影响。大肠杆菌又称为大肠埃希菌，这种细菌在肠道内正常存在，但一些血清型的大肠杆菌会引发动物机体发生抵抗力低下，导致腹泻或败血症的发生[1～3]。本研究对这两种细菌混合感染进行分析，以便兽医能更好地对患病山羊进行治疗。

1 材料与方法

1.1 一般材料

患羊病症为眼部红肿，在放牧的过程中出现神经性问题，不吃青草。本次实验中应用的试剂为血平板培养基、肠杆菌科细菌生化鉴定管（青岛高科技工业园海博生物技术有限公司）、麦康凯类琼脂培养皿，使用16s rDNA Bacterial Identification PCR Kit试剂盒（宝生物工程有限公司生产），大肠杆菌诊断血清（天津生物芯片诊断）。

1.2 方法

1.2.1 对山羊病变组织急性处理

对山羊病变的部位进行剖检，病羊剖检部位出现肺部淤血伴有坏死，心外膜增厚，肝脏肿大伴有坏死，病羊腹腔坏死，心脏外的薄膜厚度增加，其他组织有缺血情况，病羊肠道内出血。

1.2.2 细菌培养

对病羊体内细菌进行分离培养，采用接种环对病羊体内病变的器官内的组织进行挑选，使用麦康凯的平板进行划线处理，将培养皿放置在恒温箱中，温度维持在37℃，培养时间16 h以上。

1.2.3 染色鉴定

染色鉴定的方法主要采用革兰氏染色。对培养皿中的菌落进行挑选，将疑似患病的组织菌落固定在一处，采用结晶初染，滴加碘液，滴加时间控制在1 min，滴加乙醇和沙黄水溶液，时间控制在0.5 min，上述操作完成后进行吸干和镜检操作。……