魏甜甜

（青岛市即墨区畜牧业发展服务中心，山东青岛 266200）

大肠杆菌是引发鸡肠道疾病的主要致病菌，严重危害畜禽健康，影响畜禽产量和质量，给养殖业带来巨大的损失[1～3]。随着细菌耐药谱不断扩展，研究畜禽新型抗菌药物对解决耐药性问题至关重要。噬菌体治疗有明显的优势，未来对其应用价值的研究将会成为畜禽抗菌药物研究的重点。

本试验以从山东地区某肉鸡场发病肉鸡体内采集的24株致病性大肠杆菌为宿主菌，从垫料中分离噬菌体，并检测分离到的噬菌体的裂解谱，选取其中的宽噬噬菌体进行保存及研究，为治疗鸡源大肠杆菌病奠定基础。

1 材料与方法

1.1 病料采集

菌种：山东地区某肉鸡场发病肉鸡体内采集的24株致病性大肠杆菌为宿主菌。

1.2 方法

1.2.1 复苏培养菌种

用细菌接种环分别挑取适量-20℃甘油冻存的24株致病性大肠杆菌菌液，在SS琼脂培养基上分区划线分离单个菌落，将培养皿倒置于37℃恒温箱中培养16～24 h。

制备菌悬液：在已灭菌的超净台上，分别挑取粉红色单个菌落，接种到5 ml营养LB肉汤的试管中，于空气浴振荡器37℃ 200 rpm过夜培养得菌悬液，置于4℃冰箱内保存备用。

制备混合菌悬液：分别从已培养好的5 ml菌悬液中各取100 μl菌液加入到盛有 LB肉汤20 ml的三角瓶中，空气浴振荡器37℃200 rpm振荡培养6 h得混合菌悬液，4℃保存备用[4]。

1.2.2 处理垫料

将垫料5g加入生理盐水10 ml中，并用玻璃棒搅拌至均匀，呈糊状备用（有条件的可以用筛粪器将其中杂质筛除）。

1.2.3 噬菌体的分离与鉴定