张敏，张朔，张鹏，赵洪礼

(1.沈阳大学生命科学与工程学院城市有害生物治理与生态安全辽宁省重点实验室，沈阳 110044；2.沈阳百发科技有限公司，沈阳 110163；3.辽宁何氏医学院基础医学院，沈阳 110163)

玻璃膜疣是黄斑老龄化的共同特征，是其最早期的眼底表现，是年龄相关性黄斑变性(agerelated macular degeneration，AMD)的重要危险因子，与AMD的进展密切相关[1]。如果玻璃膜疣的形成能够被调整的话，AMD的发展进程可能延缓或者停止。已有研究[2-4]表明玻璃膜疣形成起始阶段为在视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium，RPE)下层微小羟基磷灰石球粒(不溶性碱性磷酸钙)以含胆固醇的脂滴为核心沉积，而其外层被Aβ、玻连蛋白、补体因子H等蛋白质包被覆盖。其中玻璃膜疣形成的起始成分为胆固醇，钙元素在RPE下的积累特别是不溶性钙的沉积加速了玻璃膜疣的形成进程。同时在细胞内钙离子广泛参与细胞信号转导，如果大量的钙离子内流引发钙超载可造成细胞的损伤及凋亡[5-6]。本研究以细胞膜钙ATP 酶1(plasma membrane Ca2+ATPase 1，PMCA1)、L型电压依赖性钙离子通道(L-type voltage-dependent calcium channel，LVDCC)和细胞膜钠钙交换蛋白1(sodium calcium exchange protein 1，NCX1)三个钙转运通道为代表，利用胆固醇培养人RPE细胞，分析RPE细胞钙转运相关通道蛋白表达水平上的变化，初步了解玻璃膜疣形成起始阶段与RPE细胞钙转运状态的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

ARPE-19细胞株购买自北纳生物(细胞系，中国)；胆固醇(≥99%)购自美国Sigma公司；RIPA lysis buffer和BCA蛋白定量检测试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；PMCA1抗体购自于英国Abcam公司，NCX1和LVDCC抗体购自于美国Proteintech公司；荧光染料购自瑞士Roche公司的light cycler 480 SYBR Green I Master。……