非洲猪瘟检测中的常见问题与分析

2021-11-23孙华伟

猪业科学 2021年10期

孙华伟

（江苏省农业科学院兽医诊断检测重点实验室，江苏南京 210014）

国内猪病实验室从2010年的“懵懂”，2015年的“发展”到2018年的“普及”，给我国猪病诊断及防控工作带来了巨大帮助。尤其是在2018年8月非洲猪瘟（ASF）暴发后，实验室检测在ASF精准剔除（拔牙）、后ASF时代猪瘟、猪蓝耳病等重大疫病的监测评估、诊断防控及净化中必将发挥重大作用。

1 荧光PCR检测的原理

荧光PCR（Q-PCR）是利用荧光信号的变化，实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化[1]。在Q-PCR反应过程中，每经过一个循环，PCR产物量增加，相应的荧光信号强度也跟着增加，此时收集一个荧光强度信号。经过若干个循环后，可以得到一条以循环数（CT）为横坐标和荧光强度变化为纵坐标的“S”形荧光扩增曲线。理论上讲经过n个循环之后，模板量就会达到2的n次方。见图1。

2 常见问题分析

2.1 检测结果出现“翘尾”，怎么处理？

首先按照要求进行复查，复查建议重新采样。如果不方便重新采样建议对原有样本重新进行提取核酸验证，如果复查为阴性则判读阴性；如果复查还是出现“翘尾”，就要对结果仔细审核。一是要排除实验室污染，二是要对病猪信息了解清楚，从临床症状排查，如果仍没法确认，建议必须重新采样复查，如有必要可以采用另一种试剂来验证。如果出现大量的弱阳性扩增翘尾，首要原因是考虑实验室被污染，可以通过做环境样本和阴性对照做验证排除。见图2。