齐越

通辽市食品药品检验所食品室 内蒙古通辽 028000

乳酸杆菌大量存在于各种乳制品中，常见的有保加利亚乳杆菌、嗜酸乳酸杆菌和乳酪乳杆菌等，这些乳酸杆菌可以被用来食品发酵和生物检定，但是一些乳酸杆菌尤其是乳杆菌也可能成为物质腐烂的主要细菌之一。在微生物种类检定中，常用高度保守性的16S rDNA 序列进行检定，本文针对含有酒花物质的啤酒，利用实时荧光PCR 技术对啤酒中的乳酸杆菌进行检测和控制，设计通用引物和特异性探针，验证该技术方法在乳酸杆菌的检定中具有高度特异性、灵敏度和快速简便的特征。

1 试验材料和试验方法

1.1 原材料

本试验选择植物乳酸杆菌、干酪乳酸杆菌、保加利亚乳酸杆菌开展试验，所有菌种均从实验室分离得到[1]。

1.2 试验设备和试剂

本试验研究选择实时荧光PCR 基因扩增设备、台式高速离心机、恒温振荡设备和厌氧罐作为试验设备，选择MRS 等培养基，以及细菌基因组DNA 提取试剂盒等试剂。

1.3 试验方法和试验步骤

首先第一步，在培养基中进行细菌培养，然后从试剂中提取基因组DNA，要求在有氧和厌氧的条件下分别培养菌种，以37℃的温度恒温培养48 小时后提取细菌。第二步，设计实时荧光PCR通用引物和特异性探针，即针对16S rDNA 序列同源性通用比较和非同源性参考菌株的特异性检测，在同源性较高的地方设计乳酸杆菌通用性引物和探针。第三步，将乳酸杆菌菌株稀释到不同的梯度后，在不同的反应温度和时间下开展灵敏度检测。……