王佳

摘要：本次课题主要针对自制品牌和国际品牌的4-甲基苯伞形酮葡糖酸苷。在检测食品中大肠杆菌活菌素的应用效果进行探讨，最终的研究结果表明，使用自制品牌4-甲基苯伞形酮葡糖酸苷的进行检测工作与国际品牌的4-甲基苯伞形酮葡糖酸苷检测工作最后获得的大肠杆菌活菌数，所得的结果具有较大的相似性。所以我们可以认为自制的4-甲基苯伞形酮葡糖酸苷产品，可以完全替代国际品牌的4-甲基苯伞形酮葡糖酸苷应用于食品检测的大肠杆菌活菌素检测工作中。

关键词：大肠杆菌;快速检测原料;4-甲基苯伞形酮葡糖酸苷;应用效果

1.材料

1.1试验材料

本次课题在进行研究的过程当中，试验期间使用的所有材料都是来自当地的食品超市，使用随机选取的方式对所有未打开包装的产品进行购买，并对样品进行提前准备。所有的产品类型11种，每种类型的材料购买30份。

1.2主要试剂及仪器

在试用的过程当中，我们需要的所有试剂以及仪器，包括水相滤膜，胰蛋白酶，366nm紫外灯，真空泵以及分析纯等等。

1.3试验方法

在进行样品检测操作之前，我们需要对所有的样品进行提前处理工作，如果样品属于固体，那么我们就需要使用无菌操作的方式对样品进行争取，称取量为25克，将其放置到255毫升的灭菌生理盐水容器当中，摇合混匀。液体的样品在提前处理时需要于23℃到37℃的环境下，经过蛋白酶处理工作。只有牛奶样品需要进行蛋白酶处理，其他样品不需要进行处理。接着再使用无菌吸管吸取25毫升的样品，放置到225毫升的灭菌生理盐水当中。在完成以上操作之后，需要以30厘米幅度，7秒内，振摇25次的方式进行稀释备用。接着我们需要将灭菌过滤的装置连接到真空抽滤瓶上，使用无菌操作的方式把无菌滤膜放置到抽滤的底座当中，进行固定操作，而在完成以上操作之后，仍然需要使用无菌操作的方式，将10毫升到20毫升的无菌蒸馏水加入到过滤器当中，打开真空泵之后进行抽取和过滤的操作。最后，将过滤之后的样品滤膜放置在琼脂平板表面，而且滤膜和琼脂表面之间不能存在气泡，接着开展培养工作，培养时间为两个小时，最后使用菌落计算的方式，对蓝白色荧光的菌落进行计算，再乘以稀释倍数，计算样品当中大肠杆菌的具体数量。

1.4产品合格评价方法

以产品卫生标准与检测结果对产品是否合格，进行综合性评价。不同类型的产品，饮用天然矿泉水，膨化食品，方便面，饮料，以及巴氏杀菌乳等产品的卫生标准，在内容方面存在比较明显的差异。

2.结果与分析

通过对收集的数据进行综合性分析，可以了解到自制4-甲基苯伞形酮葡糖酸苷和进口品牌4-甲基苯伞形酮葡糖酸苷用于食品的大肠杆菌数量检测工作，其最终的结果表现为下。而从该表当中我们也可以了解到，不同类型的4-甲基苯伞形酮葡糖酸苷应用在食品检测工作当中，其最终所得的大肠杆菌数几乎一致。

3.结论与讨论

在进行样品试验的过程当中，我们选择的方法具有多样性的特点，但是可以按照其具体方案的内容分成传统检测法以及新型检测法。传统检测法有4种不同的类型，分别是多管发酵法，平板计数法，测试片法以及滤膜法。新型检测方法主要有ATP生物发光技术，免疫磁珠法以及免疫学检测，基因芯片法，自动化仪器法，生物传感器检测法。所有的样品在检测之前都必须要先开展样品前处理，操作固体样品和液体样品需要采用不同的处理方法。

在使用多管发酵法进行4-甲基苯伞形酮葡糖酸苷的大肠杆菌数量检测工作，需要先将样品放置在44.5℃的飞行器当中，进行24小时的培养工作。在培养结束之后，使用紫外光源对培养基进行照射，如果发现检测样品当中有荧光出现，那么就可以认为该样品当中有大肠杆菌，可以通过具体分析荧光量对大肠杆菌的含量进行检测。这种检测的方法需要对样品进行发酵处理，让其在发酵管当中发酵之后，再针对待测菌进行分离及纯化工作，接着对分离之后的样品进行二次发酵。最后工作人员还需要使用格兰仕染色以及显微镜观察的方式，对荧光的数量进行分析，从而明确大肠杆菌的具体含量。多管发酵法的操作过程比较简单，而且成本低，在检测的过程当中却很容易受到其他因素的影响，对最终的检测准确性产生消极的影响。

使用平板计数法对4-甲基苯伞形酮葡糖酸苷检测，需要先对样品进行稀释工作，将样品当中含有的微生物通过稀释的方式分散成单个细胞，接着再对这些已经稀释的稀释液进行培养工作。经过一段时间的培养之后，这些细菌就会逐渐长成肉眼科观察的菌落，那么我们就可以通过收集稀释度以及样本数量的方式，对大肠杆菌的数量进行计算。

使用测试片法，对4-甲基苯伞形酮葡糖酸苷进行测试工作，可以最大程度的缩短培养基的培养时间，他在接种后，测试片人员需要进行培养，时间可以控制在24小时到48小时之内，所以他也不能满足快速检测的实际需求。

使用滤膜法进行大肠杆菌的测试工作，这种方法是常见的微生物检测方法，在进行检测的过程当中，检测人员需要先将待测的样本放在0.65纳米的滤膜上进行过滤，而样本当中的细菌就会留在滤膜上，将滤膜放在培养基进行24小时的培养工作，那么大肠杆菌群就会导致滤膜呈现出紫红色，此时检测人员就可以通过计算内膜上的菌落，推断出样本当中具体大肠杆菌的含量。

在多种类型的新型检测方法当中ATP生物发光技术的检测使用概率相对较高。 Att是活细胞当中最常见的能量，而它的代谢物主要是为细胞提供正常活动需要的各种能量，所以它在生物体当中的含量具有稳定性的特点，那么活细胞在荧光素酶的催化下，也会产生较为明显的荧光反应。所以我们可以将荧光素买放入到样品当中，如果样品当中的微生物ATP含量越多，那么发出的荧光也就越多，此时检测人员就可以通过荧光量对活细胞代谢水平进行了解，从而获取到大肠杆菌的具体数量。

使用免疫磁珠法进行大肠杆菌的测试工作需要以磁珠作为抗体的载体，在磁珠和大肠杆菌结合之后就会通过磁力实现大肠杆菌的分离操作。它可以整体提高大肠杆菌的检测效率，并且快速完成样品的微生物检测工作，这种方法在一天当中就可以获得94%的捕捉效率，而且不會出现交叉反应的情况。

使用免疫学检测法进行大肠杆菌的检测工作，可以在40分钟之内完成检测的结果，它的检测灵敏度非常高。与此同时，不会对其他类型的肠杆菌科细菌产生影响作用或者出现交叉反应。免疫学检测法的原理是将抗原的抗体的特异性反应作为原理对食品当中的大肠杆菌进行特定的抗体检测工作，它的操作方法简单，而且检测速度非常快。

基因芯片法可以对极低浓度状态下的大肠杆菌进行检测工作，它的检测灵敏度非常高，但是它需要制作带有标记的基因芯片，所以是其成本相对较高，与此同时对于检测人员也具有较高的要求。

自动免疫测定分析仪的使用方法非常简单，而且它的灵敏度和准确度也非常高，使用自动化仪器对大肠杆菌进行检测工作，目前仅局限于实验室使用，因为它的配套试剂价格非常的昂贵。

使用生物传感器检测法，对大肠杆菌进行检测工作具有成本低，稳定性高，灵敏度高以及选择性多的特点，与此同时，它还是一种可以对复杂成分进行快速在线检测的技术。在实际操作的过程当中，我们需要将DNA杂交抗原抗体反应信号转化为光信号和电信号，并且通过仪器对信号进行分析之后，得出最终的检测结果。

此次课题的研究结果显示：两种类型的4-甲基苯伞形酮葡糖酸苷在食品检测工作当中获得的结果是一致的，所以我们可以认为自制的4-甲基苯伞形酮葡糖酸苷可以代替国外品牌的4-甲基苯伞形酮葡糖酸苷进行产品的检测工作。

参考文献：

[1] 笪央央，李微，史理陇，等. 大肠杆菌利用葡萄糖和木糖合成乙醇酸，乳酸和3-羟基丁酸共聚酯[J]. 生物工程学报，2019.

[2] 王程程，郑璞，陈鹏程，等. 重组大肠杆菌发酵生产树莓酮[J]. 食品与发酵工业，2019.