张小波，冯 鹏，赵 钦，

(西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100)

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是猪的一种急性的高度接触性传染病，此病因导致猪耳朵发绀，俗称为“蓝耳病”。PRRS自1987年首次报道以来[1]，一直是危害养猪业的重要传染病，造成了巨大的经济损失[2]。疫苗接种是预防该病的重要手段之一，目前报道，除了传统的灭活疫苗和弱毒疫苗，还有新型的核酸疫苗[3]。PRRS的病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)，PRRSV在流行过程中不断变异[4-6]，为PRRS的防控带来了严重的挑战。建立快速诊断PRRSV野毒感染方法对于防控PRRS具有重要意义。

Nsp12为PRRSV的非结构蛋白，由153个氨基酸组成，分子质量为17 ku，位于ORF1b的末端。Nsp12能够利用宿主细胞的HSP70来促进病毒的复制[7]，因此，Nsp12是参与PRRSV复制的重要非结构蛋白[8]。由于Nsp12只在病毒的复制周期表达，因此，Nsp12抗体只能在具有感染性的PRRSV感染猪只中才能被检测到。研究表明，Nsp12具有保守的B细胞抗原表位[9]，能够诱导机体产生抗体，可以作为检测PRRSV野毒感染的指标。因此，本研究采用原核表达系统表达PRRSV的非结构蛋白Nsp12，利用表达的蛋白包被ELISA板，建立检测血清中抗Nsp12的抗体的方法，为检测猪场PRRSV野毒感染情况，净化PRRS提供技术保障。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 血清 抗PRRSV的阳性血清和阴性血清，由西安市灞桥区动物疾病预防控制中心兽医实验室保存；92份血清样品，通过联系不同猪场采集获得，血清样本采集的猪场均有免疫记录，且部分血清采集的猪只疑似PRRSV感染。

1.1.2 主要试剂 原核表达载体pET-32a(+)、E.coliDH5α工程菌和E.coliBL21(DE3)工程菌，由西安市灞桥区动物疾病预防控制中心兽医实验室保存；……