蔡晓丽，区贤斌，李雪平

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非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种急性、烈性、高度接触性的传染病。ASF在1921年于非洲的肯尼亚发生，其后扩散到非洲各国及欧洲、南美洲。2007年以来，ASF在全球多个国家发生、扩散、流行，特别是俄罗斯及其周边地区。该病早期发现难、防控难、根除难，被称作养猪业的头号杀手，我国将其列为一类动物疫病，也是世界动物卫生组织(OIE)规定的法定报告动物疫病。自从2018年ASF传入我国后，给养猪业造成巨大的损失。ASFV属于非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属成员，只有1个血清型，可分为24个基因型[1]。其基因组为170 kb～190 kb的双链DNA。ASFV 基因组中存在150多个开放阅读框(ORF)，成熟病毒粒子中含有68 种结构蛋白[2]。ASFV的B646L基因高度保守[3]，编码p72蛋白，是病毒粒子结构的组成部分；EP402R基因全长约1 083 bp，编码CD2v蛋白，大小约39.6 ku，也是病毒粒子的结构蛋白。在我国暴发ASF的ASFV分离株属于ASFV Ⅱ型。实时荧光定量PCR方法具备快速、准确、灵敏度高的特点，目前已成为诊断ASF的主要方法。国内外已建立了多种荧光定量PCR方法检测ASFV。2005年，Zsak L等建立了一套针对p72基因保守区域荧光PCR方法[4]，Tignon M等也建立了针对p72基因和ACTB内参基因的二重荧光PCR方法[5];董志珍等针对p54基因开发荧光PCR方法[6]。但目前国内未见有同时检测ASFV 2个基因的双重荧光定量PCR方法的报道。针对一种疫病同时检测2种基因可以提高其特异性。因此，本研究以ASFV p72和CD2v基因为靶序列，分别设计特异性引物和TaqMan探针，通过优化反应体系，目的是建立可同时检测p72和CD2v基因的双重荧光定量PCR方法，既可确定是否感染ASFV，也可用于检测ASFVCD2v基因缺失株。……