佟美姣，高雪丽，郑世民*

(1.东北农业大学，黑龙江哈尔滨 150030；2.宝清县动物疫病预防与控制中心，黑龙江省双鸭山 155600)

p53基因在机体内有多种作用，能够调控细胞周期，修复损伤DNA，抑制肿瘤发生，维持基因稳定。各物种之间保守区序列为DNA结合域的氨基酸主要的突变区域集中在编码区为5-8外显子[1]。1988年，鸡p53基因从脾细胞cDNA文库中被克隆出来，与人P53蛋白有47%相似性[2]。研究表明，在鸡体内p53的过量表达能够抑制新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒复制[3-4]，起到保护的作用。检测p53基因的方法很多，有DNA测序、色谱法、免疫组织化学、变性梯度凝胶电泳法、生物芯片、高分辨率溶解曲线技术、高通量基因测序等[1,5]，但是应用在鸡体内研究的方法较少。荧光定量PCR敏感性高，特异性和重复性好，应用到多种基因检测中效果良好[6]。根据目前研究的结果，本文将建立一种应用于检测鸡p53 mRNA的实时荧光定量PCR方法，希望能更加精确检测禽类p53 mRNA的表达，为之后的相关研究打下良好基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 SPF鸡，21日龄，品种CSIRO-MVS，购自哈尔滨兽医研究所。

1.1.2 毒株 传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒(J1C7)株，购自中国兽医药品监察所。

1.1.3 主要试剂 质粒DNA小量试剂盒，爱思进生物技术(杭州)有限公司产品；M-MLV Reverse Transcriptase，Promega(美国)公司产品；Oligo(dT)15，天根生物(北京)有限公司产品；SYBR® Premix Ex TaqTM Ⅱ，宝生物工程(大连)有限公司产品；TrizolLS Reagen，Invitrogen(美国)公司产品；感受态细胞DH5α、pMD18-T载体，TaKaRa(大连)公司产品。

1.1.4 主要仪器 荧光定量PCR仪(LightCycler2.0)，美国罗氏公司产品；PCR仪(PTC-200)，美国BIO-RAD公司产品；凝胶成像系统(GDS-800)，美国UVP公司产品；电泳仪(DYY-6C)，北京六一生物科技有限公司产品。……