董雪田，朱恺丽，曲音波，杨培龙，余晓斌，罗 玮*

（1.江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122；2.山东大学 微生物技术国家重点实验室，山东 青岛 266237；3.农业农村部 饲料生物技术重点实验室/中国农业科学院 饲料研究所，北京 100081）

番茄红素和β-胡萝卜素具有很强的抗氧化能力，具有提高免疫力、减少细胞或组织损伤、预防多种癌症及心血管疾病、降低血清胆固醇、预防白内障等功效，近年来被广泛应用于食品、药品、保健品和动物饲料等行业[1]。三孢布拉霉属于异宗接合菌，高产类胡萝卜素，且不需要特殊的生长条件，是一种理想的β-胡萝卜素和番茄红素工业生产菌株[1-4]，是工业上用于生产食品级β-胡萝卜素和番茄红素的主要微生物[4]，具有重要的经济价值。由于传统诱变选育方法存在盲目性和低效性，利用系统代谢工程和合成生物学方法进行高产菌株的选育已经成为一个重要的研究方向。由于丝状真菌细胞壁厚，对其基因组提取存在诸多问题，如方法烦琐、耗时费力，阻碍了后续基因工程和代谢工程的操作。目前常用的丝状真菌基因组提取方法有CTAB法[5]、氯化苄法[6-8]、液氮研磨法[9-11]等，这些方法普遍存在耗时长、过程烦琐、添加有毒试剂等问题，后来发展起来的一些改进的方法，如改进的CTAB法[8，12-13]，操作安全性较高、简便性较强、DNA纯度也进一步提高；除此以外也发展了一些新的方法，如微波法[8，14]、冻融法[15]、试剂盒法[16]等，分别在经济性、安全性或简便性方面有所改进，但依然要经过抽提、沉淀、洗涤、溶解等4步的重复，耗费时间依然不少于2 h，再加上种子液的培养，使得整个周期也很长，且操作过程中还会用到一些毒性较大的试剂。……