赵伟，马英，孔申嘉，张建业

青海省交通医院，青海 西宁 810000

肝癌是常见的恶性肿瘤，有极高的发病率和致死率，临床治疗以化疗为主，但治疗过程中容易出现药物抵抗，导致化疗效果欠佳［1－2］。二甲双胍（metformin，MET）是一种广泛运用于治疗糖尿病的药物，具有良好的治疗效果和较高的安全性，但近几年研究显示，MET还具有抗肿瘤作用［3－5］。大车前草是传统藏药，具有保肝利尿、止热解毒的功效，主要含黄酮类、苯乙醇苷类及甾醇类化合物，其中，苯乙醇苷类化合物具有抗氧化、抗炎的活性［6－7］。据报道，大车前苷（plantamajoside，PMS）可抑制胶质瘤细胞U－251MG增殖、侵袭及裸鼠成瘤［8］，但PMS是否可用于治疗肝癌还不清楚，故本文旨在研究PMS联用MET对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和自噬的影响，为肝癌治疗联合用药提供依据。

1 材料

1.1 细胞株肝癌细胞HepG2购自上海青旗生物技术发展有限公司，货号：BFN60800692，含STR鉴定报告，于液氮罐中保种保存。

1.2 药物与试剂盐酸二甲双胍片（天津太平洋制药有限公司，国药准字：H12020797）。PMS（四川维克奇生物科技有限公司，纯度≥98%，CAS号：104777－68－6）；3－甲基腺嘌呤（3－methyladenine，3－MA，美国MCE公司，货号：HY－19312）；胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）、杜氏培养基（dulbecco′s modified eagle medium，DMEM）、胰蛋白酶（美 国Gibco公 司，货 号：16140063、31331093、25200072）；溴脱氧尿嘧啶核苷（5－bromo－2－deoxyuridine，BrdU）试剂盒（武汉艾美捷科技有限公司，货号：AAT－17030）；赫斯特（Hoechst）染色液、抗荧光淬灭封片液、BeyoRTTMII cDNA第一链合成试剂盒、BeyoFastTMSYBR Green qPCR Mix试剂盒、放射免疫沉淀法裂解缓冲液（radio immunoprecipitation assay lysis buffer，RIPA）（上海碧云天生物科技有限公司，货号：C1017、P0126、D7168S、D7260、P0013B）；脂质体（Lipofectamine）3000转染试剂盒、Trizol裂解液（美国Thermo Fisher Scientific公司，货号：L3000008、15596018）；二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白定量试剂盒、Ki67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、半胱氨酸蛋白酶3（Caspase－3）、Caspase－9、Beclin1、p62、微管相关蛋白……