淫羊藿苷通过AMPK/mTOR 信号抑制自噬减轻糖尿病心肌肥厚研究
2021-11-04吴冰,张莲,郭烽
吴 冰,张 莲,郭 烽
(中国人民解放军联勤保障部队第940 医院老年科,甘肃 兰州 730050)
糖尿病发病率逐年升高,而心脏并发症是糖尿病患者死亡的主要原因之一,主要表现为心脏充盈受损,舒张功能下降,心肌肥厚和纤维化,称为糖尿病心肌病(diabetes acrdiomyopathy,DCM)。最新研究发现,糖尿病患者心肌自噬活性增加[1],而细胞自噬与心肌肥厚关系密切[2]。
淫羊藿苷(Icariin)是淫羊藿的主要活性成分,具有改善性功能、抗衰老、抗炎、减轻缺血损伤等作用。Icariin 能通过不同的信号通路调节自噬,且能减轻心肌纤维化[3]和心脏重构[4]。然而,Icariin 能否通过调节自噬改善糖尿病心肌肥厚,国内外未见相关报道。因此,本研究拟构建糖尿病小鼠动物模型,观察Icariin 对糖尿病心肌肥厚的影响并探究相关机制。
1 材料与方法
1.1 实验材料
雄性C57BL/6 小鼠购自联勤保障部队第940医院实验动物中心。链脲佐霉素(Streptozocin,STZ)、Icariin、mTOR 抑制剂雷帕霉素(Rapamycin)购自Sigma 公司;Beclin1、微管相关蛋白1 轻链-3B(MAP1LC3B,LC3B)、磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)(#2532)、磷酸化的AMPK(p-AMPK)(#2531)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)(#2983)、磷酸化的mTOR(p-mTOR)(#5536)抗体购自Cell Signaling Technology 公司;β-肌动蛋白(β-actin)抗体及荧光标记的二抗购自北京康为世纪生物科技有限公司;B 型尿钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)和β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)引物由上海基康生物技术有限公司合成。
1.2 糖尿病小鼠的建立
雄性C57BL/6 小鼠禁食12 h,腹腔注射55 mg/kg 1% STZ 柠檬酸盐缓冲溶液,正常对照组小鼠注射相同体积的柠檬酸盐缓冲液。连续注射5 d,每次注射后恢复自由取食。STZ 注射7 d后,测空腹血糖,空腹血糖为13.5~25 mmol/L,视为造模成功。
1.3 实验分组及干预
24 只实验C57BL/6 小鼠饲养于联……
