表达绿色荧光蛋白重组猪塞内卡病毒的构建及初步应用
2021-11-04张晓战邓同炜赵攀登彭志锋陈露露郭懿文夏艳勋乔宏兴边传周
张晓战,杨 磊,邓同炜,赵攀登,彭志锋,陈露露,郭懿文,夏艳勋,乔宏兴,边传周*,王 增
(1. 河南牧业经济学院动物医药学院,郑州 450046; 2. 河南农业大学动物医学院,郑州 450046)
猪塞内卡病毒病是一种新近在猪群暴发流行的急性传染病,病原是猪塞内卡病毒(Senecavirus A, SVA),又称为塞内加谷病毒(Seneca Valley virus, SVV),属于塞内卡毒属(Senecavirus),为该病毒属的唯一成员,且只有一种血清型[1]。SVA基因组为单股正链RNA,全长约7.3 kb,包含一个大的开放阅读框(open reading frame, ORF),其两侧分别为5′和3′非编码区(untranslated region, UTR)。其中,ORF编码由2181个氨基酸组成的多聚蛋白前体,该多聚蛋白前体在宿主和病毒蛋白酶的共同作用下裂解为12个成熟的病毒蛋白,包括4个结构蛋白和8个非结构蛋白,蛋白布局遵循标准的“L-4-3-4”小核糖核酸病毒基因组的布局,从氨基端到羧基端依次为L-VP4-VP2-VP3-VP1-2A-2B-2C-3A-3B-3C-3D[2]。VP2、VP3和VP1蛋白位于SVA病毒粒子衣壳表面,且能够与受体蛋白炭疽毒素受体1结合,介导病毒的感染[3]。2C、3A、3C和3D蛋白在病毒复制过程中参与病毒基因组的复制与合成、蛋白合成和前体蛋白酶解等过程,是病毒复制过程中重要的参与者[4-5]。
近年来,随着分子生物学和细胞生物学的快速发展,研究人员利用反向遗传操作技术将外源报告基因插入到病毒基因组中,构建病毒复制子或重组病毒来进行抗病毒蛋白和药物筛选及细胞受体筛选等过程,大大地提升了病毒学相关研究的进程[6]。截至目前,荧光蛋白或荧光素酶基因已经成功的插入到人冠状病毒[7]、肠道病毒EV71型[8]、猪瘟病毒[9]、坦布苏病毒[10]等病原中,能够稳定的伴随着病毒的复制而表达。……
