于海龙，许榜丰，石晓娜，马天馨，闫婉婉，李雪松，杨健美，滕巧泱，刘芹防，苑纯秀，赵权，李泽君

（1.吉林农业大学动物科学技术学院，长春 130118；2.中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241）

H9N2亚型禽流感是由流感病毒（Avian influenza virus，AIV）引起的一种急性、高度接触性传染病，不仅给养禽业造成巨大经济损失，而且还可能突破物种屏障直接感染人，危及人类健康[1-2]。目前，鸡胚扩增流感病毒生产疫苗是防控H9N2亚型禽流感病毒的最有效方式[3]，但用后的鸡胚残体处理需要额外的人力物力，处理不当还会污染环境。而且在短时间内需要大量病毒时，如在流感病毒大规模暴发期间，鸡胚扩增病毒无法满足快速生产需要。因此构建适宜流感病毒大量扩增的细胞系是当前流感疫苗研发需要加快解决的问题。

血凝素蛋白（Hemagglutinin，HA）是流感病毒的主要免疫蛋白，HA蛋白裂解为HA1和HA2是病毒入侵宿主细胞的前提[4]。低致病性禽流感病毒的HA裂解位点处只含有一个碱性氨基酸，只能被呼吸道和肠道所分泌的胰蛋白酶识别并裂解[5]。在细胞中培养时需使用TPCK胰酶和无血清培养液，生产成本高。高致病性禽流感病毒HA裂解位点处含有多个碱性氨基酸，能被宿主细胞内普遍存在的蛋白酶识别并裂解，在细胞中培养时无需额外添加辅助试剂。本研究构建了稳定表达突变为强毒裂解位点的H9 HA蛋白的MDCK细胞系，提供能有效支持H9N2流感病毒扩增的系统，为高效低成本生产流感疫苗提供保障。为了避免HA2蛋白的持续……