朱 晨，林汝堃，区炳雄，陈志杰，罗超华，莫志贤，李 璟

(1. 南方医科大学中医药学院，2. 广州中医药大学第二附属医院，3. 南方医科大学中心实验室，广东 广州 510515)

吗啡滥用是全球性的公共卫生问题，长期使用吗啡引起的大脑神经化学物质变化与基因表达改变密切相关[1]。越来越多的证据显示，成瘾性物质能诱导 miRNAs表达水平的变化，而成瘾相关脑区中miRNAs表达的改变直接参与了对成瘾行为的调节[2]。青风藤和钩藤是中药戒毒复方的常用药，结合本研究团队前期大量的临床和基础研究[3]，选用青风藤和钩藤的主要生物碱：青藤碱、钩藤碱和异钩藤碱进行抗吗啡依赖机制研究。本研究通过建立吗啡依赖斑马鱼模型，探讨青藤碱、钩藤碱和异钩藤碱抗吗啡依赖的作用机制。

1 材料

1.1 药品与试剂盐酸吗啡(解放军总后勤部药物供应站，批号：710303)；美沙酮(天津中央药业有限公司，批号：020111)；青藤碱(湖南正清制药集团，批号：20000528)；钩藤碱(江西佰草源生物科技有限公司，批号：BCY-0246)；异钩藤碱(江西佰草源生物科技有限公司，批号：BCY-0778)；三卡因甲基磺酸盐(美国Sigma公司，批号：MS222)。

1.2 主要仪器斑马鱼CPP箱(16 cm×9 cm×9 cm)；Noldus Ethovision XT 8.5软件(荷兰Noldus公司)；Agilent 2200 TapeStation(美国Agilent Technologies公司)；ND-1000 Nanodrop(美国Thermo Fisher公司)；Qubit 2.0(美国Life Technologies公司)；Hiseq 2500(美国Illumina公司)；梯度PCR仪(美国ABI公司)；实时定量PCR(美国Roche公司)。

1.3 实验动物斑马鱼(野生型，雌雄各半，体质量约0.35g，6-10个月)由南方医科大学中医药学院人类疾病斑马鱼模型与药物筛选实验室提供。养鱼系统为上海海圣斑马鱼养殖系统(水温为28 ℃)；鱼用盐水浓度为0.03%-0.04%；pH值为7.2-7.6；光照条件为14 h光照(8 ∶00 am-10 ∶00 pm)，10 h黑夜(10 ∶00 pm-8 ∶00 am)。……