李琳 李建东 高志康 徐浩 崔艳峰

原发性肝细胞癌(HCC)是人类最具侵袭性的高度恶性肿瘤,因为它的侵袭、转移能力,被列为癌症相关死亡的最常见原因之一［1,2］。伴随免疫学、分子生物学的发展,肝癌在免疫治疗方面已经取得了很大的进展,但高复发率仍然是延长生存期的一个主要障碍。HCC 是一种与慢性炎症相关的肿瘤。在肝细胞癌的炎症微环境中,入侵的炎症细胞主要是肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)［3］。研究表明,巨噬细胞的去除可以抑制肿瘤的进展和转移［4-6］。在肿瘤微环境下,研究巨噬细胞在肿瘤细胞侵袭转移中的分子机制［7］,将为治疗HCC 提供新的策略。为此,本研究通过分化巨噬细胞作用肝癌SMCC-7721 细胞,探究相关巨噬细胞与SMCC-7721 细胞增殖、迁移、侵袭的生物学关系,为揭示HCC 的发病机制提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料 人单核巨噬细胞(THP-1)获自中国科学院细胞库。人肝癌细胞SMCC-7721 细胞为本室保存。

1.2 实验方法

1.2.1 培养单核巨噬细胞 THP-1 在RPMI-1640 培养基(Sangon Biotech)中培养,该培养基含10%胎牛血清(FBS,Sangon Biotech)和1%青霉素/链霉素。细胞在37℃和5% CO2环境中培养。

1.2.2 巨噬细胞的极化 取处于对数生长期、生长状态良好的THP-1,按2×104/孔接种于24 孔板共培小室上室中。50 mg/ml 的MCSF 作用24 h 后诱导THP-1分化为M0 巨噬细胞；100 ng/ml 脂多糖(LPS)和γ-干扰素(IFN-γ)处理24 h,诱导THP-1 向M1 型巨噬细胞分化。THP-1 与IL-4(20 mg/ml)共孵育24 h 分化为M2 型巨噬细胞。THP-1 在含50% HepG2 细胞上清液和10%胎牛血清的RPMI-1640 培养基中培养7 d,诱导分化为TAMs。

1.2.3 细胞培养 SMCC-7721 细胞接种于含10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的RPMI-1640 培养基,37℃和5% CO2的环境中培养。

1.2.4 免疫印迹 使用组总蛋白提取试剂盒(Sangon Biotech)从细胞中提取总蛋白。……