岳蒙蒙，李 微，蒋 明，潘云生

(昆山市水产技术推广站，江苏 昆山 215300)

一、病害检测总体情况

2020年8月，昆山某养殖场发现部分鲈鱼体表溃烂、鳞片脱落等现象，临床特征表现为病鱼活动迟缓、摄食减少或不摄食、体侧或背部溃疡、鳃丝充血或出血。为明确病因，笔者对患病鲈鱼进行了病原菌分离鉴定，根据菌株形态、生理生化特征、16s RNA 序列分析，发现是维氏气单胞菌，并通过观察组织病理变化，以供从业者参考。

二、病原菌分离鉴定及病理组织切片

1.主要材料

患病鲈鱼规格180 克/尾左右，健康鲈鱼规格150 克/尾左右，均采自昆山某养殖场。LB 培养基、营养肉汤均购自上海生工生物试剂有限公司。

2.实验方法

对全市5个病害测报点发病鲈鱼样品进行致病菌分离，每次采取3 尾患病鲈鱼样品，解剖病鱼，观察各组织器官病理损伤情况。取肾、肝、鳃、肠组织，经4%多聚甲醛固定48 小时，脱水、透明、石蜡包埋后HE 染色，中性树胶封片，切片厚度5～6毫米，Olympus BX41显微镜下观察并拍照。

在无菌条件下，从患病鱼的肾、肝、鳃、肠组织取样，划线接种至LB 平板培养基，于37℃培养24～48小时，观察菌落生长形态。

取新鲜菌液送至上海生工生物有限公司进行一代测序，使用的通用引物序列为27F：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG，1492R：GGTTACCTTGTTACGACTT。将获取菌株的16s RNA 序列在GenBank 数据库进行BLAST比对。

三、结果与分析

本次实验中，挑取的菌株表面光滑、中央凸起，经革兰氏染色，分离菌株为革兰氏阴性菌。

维氏气单胞菌的鉴定方法通常需要在生理生化鉴定的基础上进行16s RNA序列分析鉴定。经生理生化鉴定与16s RNA序列分析结果，确定昆山市5个病害测报样点的病原菌为维氏气单胞菌。……