常 瑞，王 俊，付开赟，廖兰兰，丁新华，何 江，郭文超，吐尔逊·阿合买提，任 羽

(1.喀什大学生命与地理科学学院，新疆喀什 844006；2.新疆农业农村厅植物保护站，乌鲁木齐 830049；3.新疆农业科学院植物保护研究所/农业部西北荒漠化绿洲作物有害生物综合治理重点实验室，乌鲁木齐 830091；4.新疆农业科学院微生物应用研究所/新疆特殊环境微生物重点实验室，乌鲁木齐 830091)

0 引 言

【研究意义】马铃薯甲虫(LeptinotarsadecemlineataSay)是马铃薯毁灭性害虫。持续化学防治使马铃薯甲虫对部分拟除虫菊酯、氨基甲酸酯、有机磷、新烟碱类和微生物杀虫剂产生了抗性[1]。使用RNAi技术，喂食马铃薯甲虫涂抹dsRNA的马铃薯叶片，可有效降低、沉默马铃薯甲虫特定基因表达，抑制马铃薯甲虫的正常生长发育，具有高度专一性、安全性强，且植物生长发育不受影响，对挖掘更多生物防治策略具有重要意义[2]。但dsRNA生产成本高、产量无法预测、稳定性低。【前人研究进展】dsRNA在环境中极不稳定，自然条件下3～5 h就会完全降解；San等[3]发现dsRNA在紫外线照射下，4 h就会完全降解。并且其作用机制研究不系统，植物是否会传递、扩增dsRNA以及有害生物对RNAi敏感性差别大等因素[4]。目前，dsRNA主要通过3个方法大量生产：一是合成含有T7启动子的dsRNA特异性引物，运用体外合成试剂盒合成dsRNA[5,6]。二是原核生物发酵生产dsRNA，最早用于干扰秀丽引线虫,喂食秀丽引线虫时可产生强烈干扰。将构建完成的dsRNA表达载体导入RNase III缺陷型大肠杆菌HT115(DE3)感受态中，经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导，产生dsRNA[7,8]。三是通过转基因植物表达dsRNA，使植物具有“终生”防御性，害虫啃食植物后，可有效抑制其生长发育甚至直接死亡，无需人为干预[9,10]。……