文│周启升 马峰（山东省新泰市畜牧兽医事业发展服务中心）鞠瑞成（山东百沃生物科技有限公司）于建（山东农大肥业科技有限公司）刘训理（山东农业大学）

畜禽饲料在储藏过程中十分容易受黄曲霉等霉菌的污染，产生次级代谢物黄曲霉毒素（Aflatoxins），不仅可引起各种动物的急性、慢性中毒，而且具有致癌、致畸、致突变的作用，饲料中黄曲霉毒素在畜禽类产品中聚积，最终也会威胁到人类健康。鉴于此，本研究以黄曲霉等引起饲料霉变的常见霉菌为靶标，利用对峙培养法和抑菌圈法，从泰山土壤中分离筛选出7株饲料常见霉菌的拮抗菌，其中编号为S24的菌株抑菌效果尤为明显，为进一步研究利用微生物之间的拮抗作用及拮抗菌产生的活性物质预防饲料中霉菌的生长与产毒提供参考。

一、材料与方法

1.材料。黄曲霉（Aspergillus flavus），黑曲霉（Aspergillus niger），赭曲霉（Aspergillus alutacells）， 烟曲霉（Aspergillus fumigatus），由国家粮食和物资储备局科学研究院提供。高氏一号培养基、PDA培养基等。

2. 方法。

拮抗菌的分离与筛选。称取采集的营养丰富的泰山土样10克，放入无菌研钵中研碎，加100毫升无菌水制成10-1的土壤稀释液。摇床振荡30分钟，静置5分钟后，吸取上清液1毫升，做系列稀释，梯度依次为10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7。用移液器吸取50微升土壤稀释液滴于直径为7.5厘米的培养基（细菌分离采用PDA培养基，放线菌分离采用高氏一号培养基）平板中，用无菌涂布器将稀释液涂匀。将接种好的培养皿倒置放入培养箱中，30℃培养，从12小时开始有明显的菌落出现。根据微生物菌落的形状、大小、表面结构、边缘形状、质地、光泽、透明度、颜色和产生的可溶性物等特征，将单菌落一一挑出，转移到相应的PDA培养基平板上培养。……