鲍群丽 万淑琼 黄耿 汪宏良 柯俊 尚小玲

1鄂东医疗集团黄石市中心医院湖北理工学院附属医院检验科 435000；2鄂东医疗集团黄石市中心医院湖北理工学院附属医院妇科 435000；3鄂东医疗集团黄石市中心医院湖北理工学院附属医院泌尿外科 435000

卵巢癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，70%的卵巢癌患者确认时已处于晚期，5年生存率较低［1-2］。卵巢癌的高复发率和增殖是导致卵巢癌预后差的主要原因［3］。微小RNA（miRNA，miR）在卵巢癌细胞增殖中的作用及相关研究引起学者广泛的重视［4］。miRNA在卵巢癌组织中的表达水平与肿瘤细胞的恶性生物学行为存在显著相关性［5-6］。研究发现，miR-1277-5p是一种由24个核苷酸组成的miRNA，其在胃癌中发挥抑癌基因作用［7］。miR-1277-5p对卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用并不清楚。本研究通过构建miR-1277-5p过表达细胞系，观察miR-1277-5p表达变化对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。

1 材料与方法

1.1 细胞与主要试剂 卵巢癌细胞SKOV-3购于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库；McCoy's 5A培养基购于美国Gibco公司；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）试剂盒购于大连宝生物公司；结晶紫购于美国Sigma公司；对照模拟物、miR-1277-5p模拟物购于上海吉玛制药技术有限公司；Lipofectamine 3000购于美国Life Technologies公司；细胞凋亡试剂盒购自上海碧云天生物科技有限公司；一抗和辣根过氧化物酶标记的免疫球蛋白G（IgG）二抗购于美国CST公司。

1.2 细胞培养和转染 选择含10%胎牛血清的McCoy's 5A培养基培养SKOV-3细胞，培养条件选择37℃、5%CO2培养箱。按比例将稀释的对照模拟物、miR-1277-5p模拟物与Lipofectamine 3000混合，室温孵育15 min形成复合物，NC组为对数生长期SKOV-3细胞转染对照模拟物，miR-1277-5p组为对数生长期SKOV-3细胞转染miR-1277-5p模拟物。……