潘春勤 周学才 杜鹏举 刘杰

(长江大学附属仙桃市第一人民医院 1.肾病内科;2.心血管内科,湖北 仙桃 433000)

糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)是糖尿病的主要并发症，是导致其死亡的主要原因，DN的特征是：肾小球硬化、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)增多、间质纤维化[1-2]，ECM和上皮细胞-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)与肾间质纤维化的发生发展密切相关[3]。转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)是促纤维化因子，TGF-β1可以诱导DN的ECM沉积和肾小管上皮细胞的EMT发生[4]。Smad是TGF-β1下游基因，抑制TGF-β1/Smad信号通路可以抑制EMT和肾间质纤维化[5]。Runt相关转录因子3(Runt-related transcription factor 3,RUNX3)属于矮结构域家族，在肾细胞癌中RUNX3可以靶向miR-6780a-5p /E-cadherin /EMT信号转导轴，抑制肾癌细胞的迁移和侵袭[6]。目前关于DN中TGF-β/Smad/RUNX3通路发挥作用的报道较少，本研究通过观察在DN大鼠中TGF-β、Smad、RUNX3表达变化，探究TGF-β/Smad/RUNX3通路在DN大鼠肾小管上皮细胞EMT中的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选取6周龄SPF级Wistar雄性健康大鼠45只，体重120 g左右，由本院实验动物中心提供。本实验对大鼠的处理符合动物伦理要求，并经医院伦理委员会审核、批准。

1.2 主要试剂及仪器 吡非尼酮(pirfenidone,PFD)(货号：53179-13-8)购自上海迈瑞尔化学技术有限公司；链脲佐菌素(货号：V900890-1G)购自SIGMA公司；白介素1β(Interleukin-1β，IL-1β)ELISA试剂盒(货号：ml063132)、白介素6(Interleukin-6,IL-6)ELISA试剂盒(货号：ml02828)购自上海酶联生物科技公司；兔单克隆α-平滑肌肌蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)抗体(货号：SAB5500002)、E-钙黏着蛋白(E-cadherin)、兔多克隆TGF-β1抗体(货号：SAB4503751)、Smad3抗体(货号：SAB4300564)、Smad4抗体(货号：HPA019154)、RUNX3抗体(货号：SAB2107939)购自德国Merck公司；辣根过氧化物酶标记(HRP)的山羊抗兔二抗(货号：BHR101)购自北京博尔西科技有限公司；酶联免疫分析仪(型号：EVO75)购自澳大利亚Techan公司；超低温冰箱(型号：MDF-U32V)购自美国Thermo公司；生物显微镜(型号：Eclipse E200)购自日本尼康公司；……