何玉清， 亢泽峰， 李 凌， 关瑞娟

(1.青海省人民医院眼科，青海 西宁 810007；2.中国中医科学院眼科医院眼科，北京 100040)

糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病的一种微血管并发症，更是导致视力下降的主要原因[1]。视网膜微血管内皮细胞(HRCEC)是血-视网膜内屏障的重要组分，高糖刺激可促进HRCEC增殖和迁移，进而促进新血管形成，导致出血、牵拉性视网膜脱离，最终造成视力丧失[2-3]。因此，降低高糖刺激下HRCEC的增殖和迁移能力有望成为DR治疗的新方向。山楂叶总黄酮是从山楂树叶子中提取的黄酮类化合物的总称，能有效降低2型糖尿病大鼠血糖，提高机体抗氧化能力，减轻氧化应激损伤[4]，它通过抑制糖尿病大鼠视网膜神经胶质细胞muller激活，提高谷氨酰胺合成酶活性，对糖尿病眼病防治意义重大[5]。基于上述研究，本研究旨在探讨山楂叶总黄酮对高糖诱导的HRCEC增殖和迁移的影响及其潜在机制。

1 材料

1.1 细胞 视网膜微血管内皮细胞(HRCEC)，购于美国模式培养物保藏中心。

1.2 试剂与药物 DMEM培养液(批号907039)、胎牛血清(批号10270-106)购自美国Gibco公司；青链霉素双抗溶液(批号P1400)购自北京索莱宝生物科技有限公司。山楂叶总黄酮(含量≥95%，批号20140213)购于晋城中晋药业有限公司。VEGF小干扰RNA(si-VEGF)及其阴性对照(si-NC)、PCR引物购自生工生物工程(上海)股份有限公司；逆转录试剂盒(批号RR047A)、SYBR Premix Ex Taq Ⅱ(批号RR820A)购自宝生物工程(大连)有限公司；噻唑蓝(MTT)(批号C0009)、兔源Ki67抗体(AF1738)、兔源上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)抗体(AF6759)、兔源神经钙黏素(N-cadherin)抗体(AF0243)、兔源磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)抗体(AF1186)、山羊抗兔IgG(A0208)购自上海碧云天生物技术有限公司。……