谭章斌， 徐由财， 丁文俊， 邓穗晖， 刘 彬， 张竞之

(广州医科大学附属第二医院中医科，广东 广州 510260)

肝癌是最普遍和最具侵略性的恶性肿瘤之一，大多数患者确诊时已处于中晚期，并发生局部入侵或远处转移，失去了根治性手术的机会[1]。靶向药物是治疗中晚期肝癌的主要临床疗法，但目前由于其严重的不良反应和耐药性限制了其应用，故急需开发新型治疗药物。Src激酶是一种位于细胞内的非受体酪氨酸激酶，参与肿瘤生成，与肿瘤细胞增殖、抗凋亡、入侵和转移等活动行为密切相关[2]。芦荟大黄素是一种从大黄、芦荟等植物中提取出的化合物，具有多种药理活性，包括显著的抗肿瘤作用[3]。本研将考察芦荟大黄素对肝癌细胞增殖与迁移的影响，以及Src/信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路在该成分抗肝癌中的作用。

1 材料与方法

1.1 试剂 芦荟大黄素购自成都曼斯特生物科技有限公司，二甲基亚砜(DMSO, 美国Cell Signaling Technology公司)溶解，本研究以DMSO为溶剂对照组。DMEM、PBS、胎牛血清均购自美国Gibco公司；c-Myc(#9402)、p-Src(#6943)、Src(#2109)、STAT3(#12640)、GAPDH(#5174)一抗均购自美国Cell Signaling Technology公司；p-STAT3(ab76315)、Cyclin D1(ab134175)、MMP-2(ab97779)、MMP-9(ab76003)一抗均购自英国Abcam公司；MTS(G3582)购自美国Promega公司；EdU染色试剂盒(C10310-3)购自广州市锐博生物科技有限公司；结晶紫染色试剂盒(KGA229)购自江苏凯基生物技术股份有限公司。

1.2 细胞 人SMMC-7721、Hep3B肝癌细胞购自中国科学院上海细胞库，用DMEM培养，添加10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素溶液，置于5%CO2、37 ℃加湿细胞培养箱中常规培养。

1.3 细胞活性评价 采用MTS法。收集SMMC-7721和Hep3B肝癌细胞，以5×103/mL密度接种到96孔板，细胞贴壁生长后给予不同浓度的芦荟大黄素，培养24 h后弃培养基，加入MTS和DMEM混合溶液(MTS∶DMEM=1∶5)100 μL，在37 ℃下孵育1 h。……