史喜菊，赖平安，张 伟，张红梅，刘全国，柏亚铎，徐立伟，种 焱

(1.中国海关科学技术研究中心,北京 朝阳 100026;2.北京海关，北京 朝阳 100026)

近些年我国对于活动物的进口需求逐年递增，每年种猪进口数量都超过2万头，供港、澳活猪数量也非常巨大。对于这些出入境的动物每头都要进行检疫，目前主要的猪病检疫对象都是对养殖业危害巨大、世界动物卫生组织(OIE)重点关注、世界各国重点防控的疫病。但目前的检测标准和方法基本上都是针对某种病原的单一检测，针对不同的检疫条款，往往需要逐个检测不同病原。如果条款中没有规定检测某种疾病，但事实上动物可能已经感染了，就会造成漏检。而且，进境动物经过长途运输后，在隔离检疫期间可能会出现一些临床疾病，很多病原都可以引起相似的临床症状，现有单一检测技术难以全面、真实地反应畜禽感染状态和发病死亡原因[1-2]。因此，本研究选择了临床上经常混合感染又难以鉴别诊断的伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus，PRV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus，PPV)和猪圆环病毒2(Porcine circovirus type 2，PCV-2)[3-6]，建立了可用于这3种病毒混合感染检测和鉴别诊断的多重荧光PCR方法，以实现多种病原同步检测、快速灵敏地筛查“未知”病原并对混合感染进行鉴别诊断的目的。

1 材料与方法

1.1 试验材料 伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2(PCV-2)，均由本实验室收集、保存；质控对照品及其他用于特异性测试的病毒对照品，均为本实验室制备的体外重组质粒。

1.2 试剂 IQ Powermix PCR是BioRad公司产品；病毒总核酸提取试剂盒，购自天根生化科技(北京)有限公司；……