石洪中，张斌，汤承，岳华*

（1.阆中市科安康兽药服务部，四川 阆中 637400；2.西南民族大学畜牧兽医学院，四川 成都 610041）

牛病毒性腹泻病毒（BVDV）是牛病毒性腹泻（BVD）的病原体［1］，在全球许多国家流行，给全球养牛业造成了相当大的经济损失［2-3］。BVDV病毒颗粒呈球形，是一种有囊膜的单股正链RNA 病毒，属黄病毒科，犬瘟热病毒属，基因组长度约12.5 kb。基因组编码产生至少11 个成熟的蛋白质，5′UTR区域调节病毒复制、转录和翻译［4］。研究表明，根据其5′非翻译区核苷酸序列，将BVDV分为BVDV-1和BVDV-2两种不同基因型［5］。

近年来，我国牦牛感染BVDV 的情况日趋严重，给牦牛产业造成了严重损害［6-9］。尽管现有疫苗产生的保护效率并不理想，但疫苗接种仍然是预防BVDV 感染的主要防控措施［10］。本研究采用ELISA和RT-PCR方法分别检测牦牛血清和粪便中的BVDV 抗体和抗原，旨在丰富我国牦牛BVDV流行病学数据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样本采集 2020 年从牦牛屠宰场采集来自青海和甘肃的72 只健康牦牛的粪便和血清样本，包括72 份粪便和72 份血清共计144 份样本，置于-80 ℃冰箱保存备用。

1.1.2 主要试剂与仪器 Trizol 试剂（RNAiso Plus）、PrimeScriptTMRT 试剂盒和Marker Ⅱ购自宝生物工程（大连）有限公司，Quick Taq HS DyeMix购自东洋纺（上海）生物科技有限公司，牛病毒性腹泻病毒抗体检测试剂盒购自IDEXX 公司（生产批号为J621），普通PCR 仪、核酸蛋白电泳仪、凝胶成像系统Versa Doc2000 均购自Bio-Rad公司。

1.2 方法

1.2.1 血清样本中BVDV抗体的检测 用BVDV抗体检测试剂盒检测牦牛血清样本中是否存在BVDV抗体，具体方法参照说明书。

1.2.2 牦牛粪便样本总RNA 的提取 将黄豆粒大小的粪便样本加入装有400 μL DMEM 的EP管中，根据生产商说明，使用RNAios Plus提取病毒RNA。……