金一春，许柯，朱骏，曹向英，孙文梅，胡晓艳

（上海市松江区食用农产品安全监督检测中心，上海 松江 201611）

猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种急性高致病性传染病，其变异毒株的感染可引起高发病率和高死亡率，因其传播速度快、发病率高，给我国养猪业造成了严重的经济损失，成为危害当前养猪业的主要疫病之一［1］。目前，猪蓝耳病尚无特效治疗药物，我国一直采取疫苗接种的方法来预防和控制［2］。

为了解上海松江区猪群猪蓝耳病的免疫效果，准确掌握其流行病学规律，笔者于2016～2020年采用ELISA方法和荧光RT-PCR方法对本区内规模场、种养结合家庭农场的猪群在春秋两季进行集中监测。

1 材料

1.1 被检样品 选择上海市松江区规模场、种养结合家庭农场的猪群，于2016～2020 年共采集5 728份猪血液样品，其中规模场3 867份、种养结合家庭农场1 861份。

1.2 检测试剂 猪繁殖与呼吸综合征酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂盒、荧光聚合酶链式反应（RT-PCR）检测试剂盒，分别购自IDEXX 和北京生科尚仪科技有限公司；磁珠法核酸提取试剂盒购自广州美基生物科技有限公司。

2 方法

2.1 ELISA检测

2.1.1 操作步骤 检测试剂在室温下充分回温，用超纯水将浓缩洗液作10倍稀释，用样品稀释液将被检血清作40 倍稀释，阴、阳性对照血清不作稀释；在微量反应板各相应孔中加入已处理过的被检血清及阴、阳性对照血清各100 μL，振荡混匀，封膜，21 ℃下孵育30 min；用约300 μL 洗涤液重复洗涤板孔4 次，最后一次洗涤后将板拍干；每孔加入酶标抗猪IgG 抗体100 μL，振荡混匀，封膜，21 ℃下孵育30 min；……