陈微，王会如，杨忠，宋伟，朱晋升

北京市医疗器械检验研究院·医疗器械检验与安全性评价北京市重点实验室 （北京 101111）

血液分析仪是临床最常用的血液检测仪器之一，其检测结果是否准确直接影响疾病的诊断准确性和治疗效果，因此，确保检测结果准确是保证检验质量的关键[1]。使用新鲜血样本用于血液分析仪的校准，可提高不同仪器间检验结果的可比性[2]。本研究探讨二级标准血液分析仪测定红细胞和白细胞计数与参考方法测定结果的相关性，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 仪器和试剂

二级标准血液分析仪（日本希森美康公司，型号XE2100）及配套稀释液（批号为G0155、G9009）和配套溶血素（批号为R9547、R9533）；标准血细胞计数仪（日本希森美康公司，型号SCC2）；20、200 µl定量移液器（美国Drummond Scientific公司，由中国计量科学研究院进行校准取得合格证书）；A级容量瓶（北京玻璃厂，1 000 ml最大允差±0.4 ml，100 ml最大允差±0.3 ml，由中国计量科学研究院进行校准取得合格证书）；DB-1样品杯（日本希森美康株式会社）。

1.2 样本

健康人新鲜血3 0 份，使用E D T A-K2抗凝（抗凝浓度1.5～2.2 mg/ml）真空采血管，按照红细胞浓度为（3.8～5.8）×1012/L、白细胞浓度为（3.5～9.5）×109/L采血，不能发生凝固、乳糜、溶血现象，采血后6 h之内完成实验。

1.3 方法

1.3.1 参考方法测定红细胞计数

依据国际血液学标准委员会（International Committee for Standardization in Haematology，ICSH）推荐的参考方法[3]，上下颠倒充分混匀EDTA-K2抗凝新鲜血样本，使用20 µl 定量移液器吸取样本，用蘸有稀释液的低尘擦拭纸轻轻擦拭管外壁的血迹，加入装有1 000 ml 稀释液的容量瓶中，盖好瓶塞，手部抵住瓶塞倒置后，底部画圆旋转混匀，反复3次此操作后使血液均匀散开；然后将容量瓶中的稀释试样注入DB-1样品杯中，上机连续测试11次，计算第2～11次结果（CV ≤1.0%）的平均值作为每一支样本的测定值。

1.3.2 参考方法测定白细胞计数

依据 ICSH 推荐的参考方法[3]，上下颠倒充分混匀EDTA-K2抗凝新鲜血样本，使用200 µl 定量移液器吸取样本，用蘸有稀释液的低尘擦拭纸轻轻擦拭管外壁的血迹，加入装有100 ml 稀释液的容量瓶中，然后加入1 000 µl 溶血素，盖好瓶塞，手部抵住瓶塞倒置后，底部画圆旋转混匀，反复3次此操作后使血液均匀散开；然后静置15 min 完成溶血反应，将容量瓶中的稀释试样注入DB-1样品杯中，上机连续测试11次，计算第2～11次结果（CV ≤1.0%）的平均值作为每一支样本的测定值。

1.3.3 二级标准血液分析仪测定红细胞和白细胞计数

血液分析仪的工作原理：血细胞为不良导体，用等渗电解质溶液稀释的血细胞悬液通过两侧有稳定电流的小孔时，由于细胞导电性质较电解质溶液低，小孔感应区内电阻增加，瞬间引起电压变化产生一个脉冲信号，即通过脉冲；脉冲信号经过放大、甄别、整形后，送入计数系统，进而得到细胞计数结果；根据脉冲大小还可分析细胞体积，提供细胞体积分布图形。

新鲜血样本选择手动模式，每一个样本测试3次，取其平均值作为每一个样本的测定值。

1.3.4 方法的比较

每次测定3支样本，经过10个工作日统计30支样本数据。比较两种方法对红细胞和白细胞计数的测定结果，分析两者的相关性。

1.4 统计学处理

采用Microsoft Excel 2010及SPSS 22.0统计软件进行数据分析，绘制测定结果的散点图，并通过直线回归方程计算相关系数，并对两种方法的测定结果进行配对t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 直线回归方程

以两种方法的测定值作散点图，见图1、2。经对每个样本两种方法的测定值进行直线回归计算，得到以下结果：两种方法测定红细胞计数的相关系数r=0.9967（r2=0.9933），截距=0.0342，斜率=0.9912，线性方程Y=0.9912X+0.0342；两种方法测定白细胞计数的相关系数r=0.9957（r2=0.9915），截距=0.1919，斜率=0.9730。依据EP9-A2文件[4]，如果r≥0.975（或r2≥0.95），则认为X范围适合，直线回归统计的斜率及截距是可靠的[5]。

图1 红细胞计数测定值散点图

2.2 可比性

两种方法测定结果比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

表1 两种方法测定结果比较

3 讨论

图2 白细胞计数测定值散点图

根据ICSH 颁布的文件要求，血细胞分析的检测结果只有溯源至参考方法，才能保证结果的准确性和不同实验室间的可比性[6]。对于血液分析仪配套用试剂和校准品，进口产品入关手续办理难、效期短等特性，易推迟仪器校准时限，耽误实验或检验结果进度。本研究使用参考方法为新鲜血赋值，再使用二级标准血液分析仪实施量值传递过程[6]，实现了可溯源性，保证了检测数据的准确性和可靠性。

本实验室二级标准血液分析仪通过参考方法校准调整系数，从直线回归方程结果可知，r2均≥0.95，表明选择的样本浓度范围足够宽泛，直线回归统计的斜率和截距是可靠的；对两种方法的测定结果进行配对t检验，差异无统计学意义（P>0.05），表明两者具有可比性。

目前，随着各种检验技术的不断进步及实验室工作对仪器设备需求的不断增加，检测原理不断完善，测量参数不断增多，血液分析仪的各项用途和用法也在不断地发展，基本取代了手工方法。但不同生产厂家仪器的原理和方法不同，容易导致测定结果及参考范围有所差异[7]。使用可溯源到国际参考方法的血液分析仪进行新鲜血样本定值，再使用定值的新鲜血样本对其他血液分析仪进行校准[8]，可保证不同仪器间检测结果的一致性。