吴华伟，秦义娴，陈晓春，高金源，邓 永，刘 丹，苏 佳，薛青红，陈延飞

(中国兽医药品监察所，北京 100081)

副流感病毒5型(Parainfluenza virus 5，PIV5)为单股负链不分节段的RNA病毒，属于副黏病毒科(Paramyxoviridae)副黏病毒亚科(Para-myxovirinae)腮腺炎病毒属(Rubulavirus)，可引起犬、猫、猪、牛、仓鼠、豚鼠等多种动物及人呼吸道感染[1-2]。基因组大小为15246 nt，在副黏病毒科病毒中最小，遵循“六碱基原则”，其结构式为3'-NP-V/P-M-F-(SH)-HN-L-5'，其中NP、P、L三种蛋白为PIV5病毒粒子的重要组成部分，为核衣壳的装配和指导病毒转录复制所必须，相互结合可形成核糖核蛋白体。L蛋白为多功能大蛋白，含有2256个氨基酸，分子量最大，常用作副粘病毒科遗传进化分析的靶基因或PIV5分子生物学检测的靶基因[3-4]。PIV5的检测方法有病原学方法(病毒分离、分子生物学检测和血凝试验等)和血清学方法(包括免疫荧光试验、中和试验、血凝抑制试验、酶联免疫吸附试验等)[5]。荧光定量RT-PCR具有特异性强、灵敏度高、检测时间短的优点，并能有效解决普通PCR污染问题，可作为常见病原核酸的检测方法。本研究针对PIV5 L基因保守区域筛选出一对特异性引物和探针，建立了一种特异性检测PIV5的Taqman荧光定量RT-PCR方法，以期为开展动物源性原辅材料中PIV5污染检测提供有效的技术手段。

1 材料与方法

1.1 病毒株 PIV5/01株、PIV5/02株，由中国兽医药品监察所分离、鉴定和保存。

1.2 主要试剂、试剂盒 AxyPrep Body Fluid Viral DNA/RNA Miniprep Kit，Axygen公司产品；Reverse Transcriptase M-MLV(RNase H-)，TaKaRa公司；快捷型琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒II型(离心柱型)，Bioteke公司；KOD FX Neo，TOYOBO公司；M-MLV III One-Step qPCR-PCR(Probe)，北京博迈德公司；pEasy Blunt Simple、DNA分子量标准品(DL2000)、50×TAE电泳缓冲液，琼脂糖等，北京全式金公司。

1.3 主要仪器 台式离心机；……