黄奕森，苏子剑，张剑华，潘剑辉，刘小瑜 (.福建医科大学附属泉州第一医院消化内科，福建 泉州 36000；.福建医科大学附属泉州第一医院肝胆外科，福建 泉州 36000)

神经降压素(NTS)是一个含有13个氨基酸的神经肽[1]， NTS广泛表达在人类和动物的大脑和胃肠道中。已有研究表明，NTS可以为多种类型上皮细胞来源的恶性肿瘤提供一种生长信号促进肿瘤的增殖，包括结肠癌乳腺癌[2-3]、肺癌[4]、胰腺癌[5]、前列腺癌[6]。NTS的作用由三种类型的NTS受体介导 (NTSRs)，包括高亲和力受体NTSR1和NTSR2，低亲和力受体NTSR3[7]。NTS高亲和力受体 NTSR1参与介导了NTS 的生理及病理作用。研究发现 NTS /NTSR1信号的异常与人类多种恶性肿瘤(如结肠癌[8]、前列腺癌[9]、恶性B淋巴细胞瘤[10]等)的发生发展关系密切。本次研究经过本院医学伦理委员会同意，旨在通过体内外实验确定NTSR1在胆管癌增殖浸润转移中的作用，初步探明NTS/NTSR1在胆管癌的增殖转移中的作用机制。现报告如下。

1 材料和方法

1.1主要实验材料及试剂:细胞增殖检测试剂MTS购自promega(G3581),Anti-Neurotensin Receptor 1/NTSR1 antibody (ab117592) ，Anti-ERK1 + ERK2 (phospho T202 + Y204) antibody [SP327] (ab223500)、Anti-p38 (phospho T180 + Y182) antibody (ab4822)、Recombinant Anti-JNK1 + JNK2 + JNK3 (phospho T183+T183+T221) antibody [EPR5693] (ab124956)及Anti-PKC alpha (phospho S657 + Y658) antibody (ab23513)和Anti-GAPDH antibody [mAbcam 9484]均购自ABCAM。试验用培养基及血清均购自Gibco公司,实验中耗材均购自GreinerBioOne。

1.2NTSR1特异性拮抗剂SR48692对人胆管细胞癌细胞HUCCT1-1增殖迁移影响:用MTS方法检测加入不同浓度5 μmol/L和10 μmol/L特异性拮抗剂SR48692后24 hr，48 hr，72 hr细胞增殖能力。通过transwell小室实验检测加入不同浓度5 μmol/L和10 μmol/L特异性拮抗剂SR48692后细胞迁移能力变化。

1.3筛选胆管癌细胞并进行改造：培养并收取相同数量的RBE、HUCCT1、HCCC 9810、 CCLP-1四株胆管癌细胞，用RIPA的方法提取蛋白质，用WESTERN BLOT的方法检测RBE、HUCCT1、HCCC 9810、 CCLP-1四株胆管癌细胞中NTSR1的表达差异，根据结果选出较高表达量的细胞株HUCCT1进行改造。……