葛亮 李光才 张明华 谭伟

缺血再灌注引起的急性肺损伤导致肺上皮和内皮细胞死亡并伴有炎症[1]。急性肺损伤会促进和(或)使肺部发病机制(包括纤维化)永久化[2]。急性肺损伤会导致过度的炎性反应和氧化应激。氧化应激导致炎性细胞募集而导致炎症，而炎性细胞引起氧化应激的诱导[3]。转录因子Nrf2诱导细胞保护性基因表达并赋予抗缺血性肺损伤的保护，并且Nrf2介导的信号传导对于恢复肺损伤后的肺稳态也至关重要[4]。尽管已经报道过PI3K/AKT信号是肺上皮细胞中Nrf2激活所必需的，但是在缺血再灌注肺损伤和修复过程中PI3K/AKT-Nrf2串扰的重要性仍不清楚[5]。Nrf2是内源性抗氧化剂防御分子的关键调节剂之一[6]。Nrf2促进各种下游抗氧化剂基因的转录，包括血红素加氧酶1(heme oxygenase 1，HO-1)，NAD(P) H:醌氧化还原酶1[NAD(P) H:quinone oxidoreductasel，Nqo1]和其他Ⅱ期抗氧化剂酶[7]。此外，Nrf2在保护脑细胞免受缺血性中风损伤中起重要作用[8]。Nrf2基因的敲除增加了缺血再灌注小鼠肺缺损。因此，本研究探讨转录因子Nrf2通过在复氧过程中保护线粒体功能和DNA促进内皮细胞存活和肺稳态的机制。

1 材料与方法

1.1 实验小鼠与细胞培养 研究中使用20只野生型(Nrf2 +/+)和Nrf2缺乏(Nrf2-/-)小鼠CD-1/ICR株[购自南方医科大学实验动物管理中心，合格证号：SCXK(粤)2016-0041]，平均8～9周龄，雌性，25～30 g。每个笼子收容小鼠5只，期间小鼠可随意获得食物和水。使用改良方法分离小鼠肺血管内皮细胞(MLVEC)。在用氯胺酮(70 mg/kg)和甲苯噻嗪(10 mg/kg)的混合物麻醉后，向小鼠右心室(3～4周龄)灌注PBS，以清除肺部血液。将周围的胸膜下肺组织切……