龚 平，陈 娴，李咏梅，曾 艳，唐冰璇，蒋海燕，刘冬华，伍善东

（湖南省微生物研究院，湖南 长沙 410009）

植物内生菌（Plant endophyte）是指能够定殖在植物组织内部，对宿主植物不造成任何感染或负面影响的一类微生物。植物内生菌对宿主植物的已知有益作用有固氮作用、促进植物生长、增强抗逆性、抗病原真菌及细菌能力等。基于植物内生菌这些有益作用，其可作为优良的潜在生防资源和外源基因载体。近年来，随着人类环境保护意识的增强，绿色农业的兴起，内生菌已逐渐成为国内外研究的热点[1-7]。湖南省微生物研究院前期在对从油菜植株中分离得到的内生菌进行功能筛选时，发现一株优秀内生菌株4-3，该菌株不仅具有很强的拮抗菌核病核盘病菌的能力，还具有优良的溶磷解钾的功能，具有良好的应用前景。试验对内生菌4-3的培养条件进行了优化，以期为该菌株的进一步研发提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 供试菌株 内生菌株4-3为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens），油菜内生菌，由课题组分离、筛选，该菌株具有很强的拮抗菌核病核盘病菌的能力，还具有优良的溶磷解钾的功能。保藏编号为CCTCC M NO:2014320。

1.1.2 培养基 PDA加富培养基：20%土豆（煮汁），2.0%葡萄糖，0.2%酵母膏，0.05%硫酸镁，0.1%磷酸二氢钾，1.8%琼脂，pH值7.0，用于菌株4-3斜面培养与活化；PDA液体培养基：20%土豆（煮汁），2.0%蔗糖，0.2%酵母膏，0.1%硫酸镁，0.2%磷酸二氢钾，pH值7.0，用于菌株4-3液体培养。

1.2 试验方法

1.2.1 活菌计数方法 吸取试验菌液5 mL至装有玻璃珠、45 mL无菌水的锥瓶中，180 r/min震荡30 min，吸取震荡好的菌液0.5 mL至4.5 mL无菌蒸馏水中进行稀释至8阶(含三角瓶稀释的一阶)。……