朱曼玲，齐鹏飞，丁召亮，刘文强，程国明，杨宏军，王长法，张伟

（1.聊城毛驴高效繁育与生态饲养研究院，山东 聊城 252000；2.山东省农业科学院，山东 济南 250100；3.山东东阿黑毛驴牧业科技有限公司，山东 聊城 252000；4.东营市畜牧兽医站，山东 东营 257091）

山东省规模化驴场存栏量占全省驴存栏总量的80%左右，其组织化、规模化程度居全国前列。规模化养驴比传统分散养殖在饲养管理、营养调配、环境控制等方面均发生了较大变化，但在疫病防控、绿色生产等方面相对于其它畜禽的养殖水平仍有差距。驴驹腹泻问题严重，导致繁殖率、生产性能下降，严重影响了养殖效益。为明晰集约化驴场细菌感染及流行状况，为规模化驴场提供科学防控策略，本试验于2018—2020年对山东一规模化驴场进行了系统的流行病学调查与研究。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 病料 从驴产业优势聚集区山东聊城某规模化驴场采集新鲜的临床组织病料液氮保存运输，肠道拭子4℃保存运输。

1.1.2 主要试剂 5%绵羊鲜血平板、营养肉汤琼脂平板、营养肉汤培养基、2×TaqPCR Master Mix、ddH2O、EasyPureⓇBacteria Genomic DNA Kit，购自北京全式金生物技术有限公司；DL 2000 DNA Marker，购自北京天根生化科技有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 菌株的分离培养 将采集的冷藏病料组织置于超净工作台中，用接种环取病料组织内部并接种至5%绵羊鲜血平板培养基中，置于37℃恒温箱培养24 h，观察菌落形态。挑取优势单个菌落接种于营养肉汤琼脂平板培养基中进行纯化培养。

1.2.2 OTUs聚类和物种分类分析 采用CTAB法提取样品基因组DNA，利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA纯度和浓度，备用。……