潘怡霞，林亚云，刘 妍，郭凡凡，张文涛，白桂芹

（1.西安交通大学第一附属医院妇产科，陕西西安 710061；2.昆明医科大学第一附属医院生殖遗传科，云南昆明 650032；3.解放军总医院第五医学中心，临床研究管理中心，北京 100039；4.西安市第三医院妇产科，陕西西安 710016）

中国是乙肝病毒（hepatitis B virus,HBV）感染的高发地带，人群HBV携带率为9.9%，HBV感染与慢性肝炎、肝硬化和肝癌密切相关[1-3]。HBV母婴传播包括宫内感染、分娩过程中的感染和分娩后的感染[4]。从母亲到婴儿的后两种传播途径可通过在婴儿出生后立即使用HBV疫苗和HBV免疫球蛋白（hepatitis B immunoglobulin,HBIG）治疗而阻断[5]。但仍然有5%~10%的婴儿未能阻断HBV感染，这主要是发生宫内感染所致[6-9]。本课题组前期的研究发现HBV可通过母体血液接触胎盘并感染胎盘滋养细胞，产生乙肝X蛋白（hepatitis B X protein,HBx），与胞内磷脂酰肌醇激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）、丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶（protein ki⁃nase B,Akt）抑制滋养细胞凋亡的信号通路有关[10-11]。本研究将进一步明确HBx蛋白通过内皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）/PI3K/Akt信号通路抑制胎盘滋养细胞凋亡的具体机制。

1 材料与方法

1.1 材料人绒毛膜癌细胞株JEG-3（中科院上海生命科学研究院细胞库），人滋养细胞HTR-8（第四军医大学唐都医院妇产科实验室），DMEM高糖培养、RPMI-1640培养基（美国Gibco公司）；优质胎牛血清（美国Gibco公司），胰蛋白酶（Amresco公司）。EGFR过表达慢病毒颗粒（复能基因），EGFR shRNA（维真生物），pGL3-EGFR启动子荧光素酶表达质粒（上海宇玫博生物），pGL3-basic、pGL3-control、pRLTK质粒（Promega公司），pGFP-HBx表达质粒（Add⁃gene）；质粒提取试剂盒、胶回收试剂盒（上海生工生物工程有限公司、德国QIAGEN公司）；0.22 μm滤器（Millpore公司）；转染试剂X-tremeGENE HD（德国Roche公司）。兔抗人HBx多克隆抗体、兔抗人EGFR多克隆抗体（Abcam公司），兔抗人PI3K单克隆抗体、兔抗人p-Akt单克隆抗体、兔抗人Akt单克隆抗体（Cell Signaling公司）；……