李星瑶，赵延红，蔡子墨，叶冰玉，安鹏，张爱军，石兴民，董盛，吴喜利*

(1.西安交通大学第二附属医院，陕西 西安 710004；2.陕西省中西医结合医院，陕西 西安 710082；3.西安交通大学医学部，陕西 西安 710061；4.陕西中医药大学附属医院，陕西 咸阳 712023)

1 材料

1.1 动物

60只SPF级雄性SD大鼠，体质量(200±20)g，饲养温度保持在25 ℃，相对湿度为40%～60%，每天人工照明12 h。由西安交通大学医学部实验动物中心提供，许可证号：SCXK(陕)2012-003，所有操作均通过西安交通大学动物伦理委员会批准。

1.2 药物及试剂

复方由黑附片15 g(先煎)，生黄芪15 g，山萸肉15 g，金樱子45 g，芡实30 g，生大黄10 g(后下)，泽兰15 g，川芎15 g，桂枝25 g，茯苓15 g，车前子20 g(包煎)等组成。经煎煮、减压、过滤、浓缩得复方溶液，相当于生药浓度1.55 g/mL，实验时配制为高、中、低3种剂量溶液。注射用盐酸多柔比星(阿霉素)，海正辉瑞制药有限公司(H33021980)；醋酸泼尼松片，浙江仙琚制药股份有限公司(071 088)；蛋白抽提试剂盒，碧云天生物技术研究所(P0033)；兔抗TRPC6 IgG单克隆抗体，美国Abcam公司(ab137028)；小鼠抗β-Actin单克隆抗体，美国CMCTAG公司(AT0001)；HRP标记山羊抗兔IgG二抗，西安壮志生物科技有限公司(P48010)。SP法免疫组化染色法检测试剂盒，北京中杉金桥有限公司(SP-9000)。

1.3 仪器

TCS SP8激光共聚焦显微镜(德国Lecia公司)；Ti-E全自动荧光倒置显微镜(日本Nikon Eclipse)；G:Box凝胶成像系统(英国Syngene公司)；Revco Elite超低温冰箱(美国Thermo公司)；5810R冷冻型台式大容量高速离心机(德国Eppendorf公司)；蛋白电泳仪(美国Bio-Rad公司)；半干转移槽(美国Bio-Rad公司)。

2 方法

2.1 分组及模型的制备

60只健康雄性SD大鼠随机分为6组(对照组、模型组、泼尼松组、温阳化浊方高剂量组、温阳化浊方中剂量组、温阳化浊方低剂量……