李新军，钟敏华，吴展陵，曹玲莉，邱 琦，涂平华，汪娜娜，彭闪闪，高 飞

(湖北省孝感市中心医院，湖北 孝感 432000)

在我国肺癌发病率和病死率居恶性肿瘤首位[1]。其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer ，NSCLC)占肺癌的85%以上，据报道我国有逾2/3的患者临床确诊时已错过最佳手术时机，5年生存率较低[2]。因此，积极探索并发现影响NSCLC患者疾病发展及预后的相关机制具有十分重要的意义。近年来，大量证据表明 miRNA在包括NSCLC在内癌症发生和发展中起到重要作用[3,4]。miR-145和肿瘤发生发展密切相关，如胆管癌、口腔癌、胰腺癌、前列腺癌等[5]，然而，miR-145对NSCLC发生和发展的相关分子机制尚未得到阐明。因此，我们研究的目的是评估miR-145-5p与NSCLC的关联，尝试发现miR-145-5p在NSCLC疾病进展中的分子机制。

1 材料与方法

1.1临床标本:2019年10月至2021年1月间，收集孝感市中心医院14例NSCLC患者癌组织及其相邻的非癌组织。每位参与者均知悉研究内容并签署了知情同意书。所有材料和方法均获得孝感市中心医院伦理委员会批准。

1.2细胞培养:NSCLC细胞系(A549)和非肿瘤细胞系(BEAS-2B)购自美国典型培养物保藏中心(ATCC，Manassass，弗吉尼亚州，美国)。将细胞培养在加有10%胎牛血清(Hyclone，美国)和100U/mL青霉素-链霉素(Hyclone，美国)的RPMI-1640培养基(Gibco，美国)中，置于5%CO2的37℃的潮湿细胞培养箱中培养。

1.3细胞转染:miR-145-5p模拟物及其阴性对照；pcDNA-PHB2及其阴性对照分别购自GenePharma(中国上海)。按照制造商(Invitrogen，美国)的说明，使用Lipofectamine®2000进行质粒和pc-DNA转染。

1.4细胞活力测定

1.4.1进行MTT测定以分析细胞的存活力。将细胞接种到96孔板中，加入20μL MTT(5mg/mL，Sigma-Aldrich;Merck KGaA，Darmstadt，德国)。将细胞在37℃下再孵育4h，然后加入150μL DMSO。在室温下反应10min后，在570nm处通过Multiskan FC酶免疫测定分析仪测量光密度(OD)，检测细胞增殖水平。……