吴鸿，高海霞，高水波，王新洲，韩丽华，王振涛

河南中医药大学第二附属医院／河南省中医院，河南 郑州 450002

益气活血方（yiqi huoxue decoction，YHD）是复方制剂，由黄芪、人参、赤芍、红花等药组成，临床广泛用于冠心病等心血管疾病的治疗［1］。前期研究发现，YHD具有抗血小板聚集［2－3］、抑制左室重构［4－5］、促进血管新生［6－7］等作用，提示YHD具有良好的心肌保护功能。研究发现，缺氧可诱导体外培养的心肌细胞发生凋亡［8－9］，抗凋亡蛋白Bcl－2表达下调，促凋亡蛋白Bax表达上调［10－11］，而半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase－3）的激活被认为是细胞发生凋亡重要的标志［12－13］。YHD对缺氧心肌的保护作用是否涉及到细胞凋亡尚未见报道。本实验通过过氧化氢（H2O2）诱导体外培养大鼠H9c2心肌细胞发生凋亡，观察YHD对心肌细胞凋亡的影响。

1 材料

1.1 细胞大鼠心肌细胞H9c2购自中科院上海细胞库，批号：GNR 5。

1.2 药物与试剂YHD（由黄芪、人参、红花、赤芍组成，四川新绿色药业科技发展有限公司，批号：0029912783）；辛伐他汀（simvastation，ST）（美国Sigma公司，批号：S6196）。DMEM高糖培养基（以色列BI公司，批号：06－1055－57－1ACS）；胰蛋白酶（以色列BI公司，批号：03－050－1ACS）；胎牛血清（美国Gibco公司，批号：16000－044）；H2O2（美国Sigma公司，批号：88597）；四氮唑蓝（MTT）（美国Sigma公司，批号：N6876）；二甲基亚砜（DMSO）（美国Sigma公司，批号：D2650）；AnnexinV－FITC细胞凋亡检测试剂盒购自苏州碧云天生物技术有限公司（上海碧云天生物技术有限公司，批号：C1062M）；BCA蛋白浓度测定试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司，P0012）；SDS－PAGE凝胶试剂盒（西安晶彩生物公司，批号：JC－PE022）；ECL发光液（西安晶彩生物公司，批号：JC－PC022）；Bcl－2抗体（武汉三鹰生物公司，批号：12789－1－AP）；Bax抗体（武汉三鹰生物公司，批号：50599－2－Ig）；Caspase－3抗体（武汉三鹰生物公司，批号：66470－2－Ig）；……