李钦丽，张继伟

我国肺癌的发病率和病死率呈逐年增加趋势，已位居各类癌症的首位[1]。随着靶向治疗的发展，EGFR突变状态已成为指导晚期肺腺癌治疗的重要指标[2]，其基因状态的检测对靶向药物的选择起到至关重要的作用。但肺癌晚期患者已失去手术机会，只能获取活检样本或胸腹水样本，经常规HE及免疫组化染色，剩余肿瘤组织不足以进行EGFR检测，直接影响患者的后续治疗。本实验通过对HE切片经高锰酸钾草酸和盐酸乙醇两种方法褪色后行EGFR基因突变的检测进行对比，探讨两种方法对HE切片褪色后行EGFR检测的影响，为肿瘤组织不足的肺癌患者后续治疗提供可靠依据。

1 材料与方法

1.1 材料选取EGFR 21号外显子L858R突变阳性的肺腺癌标本3例，每例标本各选取1个蜡块，4 μm厚连续切片6张，分为白片组、高锰酸钾草酸褪色组和盐酸乙醇褪色组，每组切片2张。

1.2 主要试剂及仪器核酸提取试剂盒(FFPE DNA)、人类EGFR基因突变检测试剂盒、SMA4000超微量紫外可见核酸蛋白分析仪，购自厦门艾德公司；Quant Studio 3D Digital PCR Master Mix v2、EGFR Custom TaqMan SNP Genotyping Assays、Quant Studio 3D Digital PCR System，购自赛默飞公司；Mx3000P型荧光定量PCR仪，购自安捷伦公司。

1.3 方法

1.3.1HE染色与褪色 经常规HE染色后，HE切片用烤片机加热，当盖玻片内的中性树胶产生气泡时，将切片置入康莱中浸泡至盖玻片自行脱落。将切片置于新鲜康莱2次，每次5 min，保证洗净中性树胶，梯度乙醇(100%、95%、85%、75%)脱去康莱，用蒸馏水冲洗。(1)将切片放入0.5%高锰酸钾氧化5 min，蒸馏水冲洗干净，2%草酸溶液漂白，待组织完全变白后用蒸馏水冲洗干净，显微镜下观察褪色效果；……