李凡妮，张 磊，于田雨，佘军军，孙 祺

肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma, iCCA)起源于肝内胆管上皮，是常见的肝脏恶性肿瘤，占肝脏原发恶性肿瘤的5%～30%[1]。由于早期临床症状不典型以及进展快速的特性，大多数iCCA患者在初诊时通常已失去根治性手术机会，放、化疗等辅助治疗的效果也并不理想[2-3]。iCCA患者预后较差，即使是接受根治性切除术的iCCA患者，其5年总生存率仍低于40%[4]。目前，针对iCCA的个性化治疗尚缺乏有效的靶向治疗[5]。因此，明确iCCA发生、发展的机制，并寻找有效的分子靶点对iCCA的治疗尤为重要。ANXA9是膜联蛋白家族ANXA亚组中的一员，其在肿瘤的进展过程中发挥重要作用。已有文献报道ANXA9在胃癌组织中高表达，其与组织分化程度和预后有关[6]，并且能促进结肠癌细胞的增殖[7]，但ANXA9与iCCA的相关性尚未见报道。本文着重探讨ANXA9在iCCA中的表达，并通过干预ANXA9的表达及细胞功能学实验进一步明确其对iCCA侵袭的影响，以期为iCCA的治疗靶点提供参考。

1 材料与方法

1.1 临床资料收集2020年6～9月西安交通大学第一附属医院接受根治性切除术的12例iCCA患者的新鲜癌组织及相应的癌旁正常组织。另收集67例行根治性切除术患者的iCCA蜡块并制备成组织切片。本实验经我院伦理委员会批准，患者均知情同意。

1.2 细胞株人iCCA细胞株HuCCT1，购自武汉普诺赛公司。

1.3 方法

1.3.1免疫组化 石蜡切片脱蜡水化后，使用柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0)结合微波进行表位抗原修复，用3%过氧化氢处理30 min，以淬灭内源性过氧化物酶活性。用10%正常山羊血清处理30 min，与抗人ANXA9的小鼠单克隆抗体(sc-374288，Santa Cruz公司)在4 ℃孵育过夜，与抗小鼠二抗孵育30 min，通过DAB(上海碧云天公司)进行免疫组化SP法染色，苏木精复染，脱水封固。……