【摘要】目的：于酶联免疫吸附法漏检的HIV（人类免疫缺陷病毒）和HBV（乙型肝炎病毒）血样筛查中应用核酸检测技术的效果进行研究。方法：对2018年1月到2020年1月的4000份经两遍酶联免疫吸附法检测后各项指标均呈阴性的无偿献血者血液标本进行研究，标本经六混样两种试剂做核酸检测，对阳性标本用两种试剂拆分做胆管核酸检测，总结检测结果。结果：在4000份经两遍酶联免疫吸附法检测后各项指标均呈阴性的无偿献血者血液标本中，经核酸检测技术筛查出有4份是乙型肝炎病毒阳性标本、1份是人类免疫缺陷病毒阳性标本。结论：血液标本即便是经两次酶联免疫吸附法检测时，仍存在漏检人类免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒的风险，应用核酸检测技术可有效筛查出漏检人类免疫缺陷病毒、乙型肝炎病的标本，而进一步确保用血质量、安全。

【关键词】输血；人类免疫缺陷病毒；乙型肝炎病毒；酶联免疫吸附法；核酸检测技术；应用价值

[中图分类号]R446.6 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249（2021）07-0141-02

输血是临床重要的一种治疗方式，可及时补充患者血容量，挽救生命。在输血中，要严格确保输血质量以及安全，但人类免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒以及丙型肝炎病毒等可经血传播的病毒一直是输血安全上最受人们关注的一个问题[1]。酶联免疫吸附法是以往血液常规筛查的一种手段，可检测无偿献血者血液中的病毒抗体、病毒抗原，并以此当做血液感染与否的指标[2]。酶联免疫吸附法可明显降低通过输血传播人类免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒以及丙型肝炎病毒等风险，但是由于抗体、抗原检测是标志物的间接检测方法，窗口期较长，并会受病毒变异、免疫沉默性感染以及病毒滴度等因素的影响，导致经输血传播人类免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒以及丙型肝炎病毒等风险仍然存在[3]。而核酸检测技术是对病毒核酸直接进行检测，其检测窗口期明显缩短，而且在窗口期也能检测出人类免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒以及丙型肝炎病毒，同时还可避免因病毒变异、免疫沉默性感染以及病毒滴度等因素造成的漏检，弥补酶联免疫吸附法的不足，进一步的降低经输血传播人类免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒以及丙型肝炎病毒等风險[4]。本课题主要是探究酶联免疫吸附法漏检的HIV和HBV血样筛查中应用核酸检测技术的效果，请见下文。

1 资料和方法

1.1临床资料 对2018年1月到2020年1月的4000份经两遍酶联免疫吸附法检测后各项指标均呈阴性的无偿献血者血液标本进行研究，采集血液后，在核酸检测分离胶试管中保存，4 h内进行离心，3000 r/min，20 min，之后在4℃的环境下进行保存。

1.2方法 （1）试剂和仪器：低温离心机，瑞士IVD混样仪，Cobas AmpliPrep、Cobas TaqMan，Cobsa TaqScree MPX试剂盒，Cobsa TaqScree洗液、Cobsa TaqScree MPX V2对照试剂盒，Cobsa TaqScree MPX对照试剂盒。（2）检测方法：①酶联免疫吸附法：标本做两遍酶联免疫吸附法检测，加样器自动加样，全自动酶联免疫吸附分析仪对抗乙型肝炎表面抗原、人类免疫缺陷病毒抗体、乙型肝炎病毒抗体进行两次检测，按《中国输血技术操作规程》关于血站部分的标准对检测结果进行判定当标本的酶联免疫吸附法检测是阴性，而核酸检测是阳性时，重新取样做酶联免疫吸附法检测。②核酸检测技术筛查：在生物安全柜中，打开标本盖，在样本架上放置，混样仪自动开展六混样处理，平行混合两份。一份是经全自动血液病毒核酸检测仪+MPX试剂盒开展核酸检测，对人类免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒以及丙型肝炎病毒进行检测。另外一份经另外一台检测仪+MPX V2试剂盒开展核酸检测，其检测内容同上一份一致。当六混样试管阳性，就做拆分单管核酸检测。六混样初筛结果是两种试剂均判定是阳性，而拆分检测结果也是阳性，则样本核酸检测就是阳性。

2 结果

2.1总结窗口期酶联免疫吸附法的两次检测结果 自动加样后（加样器），在两台全自动酶免分析仪上使用两种不同厂家试剂进行两次乙型肝炎表面抗原、人类免疫缺陷病毒抗体、乙型肝炎病毒抗体的酶联免疫吸附法检测，光密度值分别是0.002、0.047，而判定是阴性。核酸检测发现该标本是人类免疫缺陷病毒阳性，从血袋再次取标本同时使用两种试剂进行检测，光密度值分别是0.006、0.040，再次判定酶联免疫吸附检测结果仍呈阴性。

2.2总结漏检人类免疫缺陷病毒标本的核酸检测结果Cobas TaqScreen MPX的六混样聚合酶链式反应扩增曲线上，荧光探针在第19.2个循环时就有靶标核酸片段检出，但内置控没有扩增出来，而该批次的其他阴性样本检测中均扩增出内置控，推测该样本的病毒载量浓度过高，使反应被抑制。Cobas TaqScreen MPX第二代制剂的六混样聚合酶链式反应扩增曲线上，荧光探针在第21.8个循环时就有靶标核酸片段检出，该试剂选择多荧光探针技术，CH4是内置控、CH1是人类免疫缺陷病毒，同内置控多荧光探针技术相比，六混样检测的灵敏度较很好，且在高浓度抑制扩增上内置控也有改进。

2.3总结漏检人类免疫缺陷病毒标本的核酸检测拆分单检结果 单管核酸检测的聚合酶链式反应扩增曲线上，荧光探针在第16.4个循环时就有靶标核酸片段检出，说明浓度更高，但仍未扩增出内置控，从而更有理由推断是其病毒载量浓度过高，使反应被抑制。所以，经阴性血浆把标本稀释400倍，之后再进行核酸检测，Cobas TaqScreen MPX试剂复孔进行单管核酸检测，荧光探针在第24.7个循环时就有靶标核酸片段检出，在第30.3个循环时内置控在扩增曲线开始抬头，样本稀释后不在抑制内置控扩增，但稀释后样本仍远提前于内置控扩增。在第19个循环时CH1探针就有靶标核酸片段检出，判定样本人类免疫缺陷病毒阳性。

2.4总结酶联免疫吸附法漏检乙型肝炎病毒的情况在4000份血液标本中，核酸检测工检出4份乙型肝炎病毒阳性标本，检出率是0.10%。

3 讨论

在本课题的4000份经两遍酶联免疫吸附法检测后各项指标均呈阴性的无偿献血者血液标本中，经核酸检测技术筛查出有4份是乙型肝炎病毒阳性标本、1份是人类免疫缺陷病毒阳性标本。从而得知：即便是经过两遍酶联免疫吸附法检测，无偿献血者血液标本仍存在人类免疫缺陷病毒感染、乙型肝炎病毒感染的情况，影响用血安全[5]。对于核酸技术来说，尽管可筛查出酶联免疫吸附法对于人类免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒的漏检标本，但是不能彻底的消除乙型肝炎病毒窗口期，不过能够把经输血传播乙型肝炎病毒的风险降到最低[6]。

目前在全世界范围内，抗体检测相关试剂已发展到第四代，对于前三代试剂来说，主要是对两种抗体进行检测，而第四代试剂能够同时检测免疫球蛋白M抗体、免疫球蛋白G抗体、P24抗原，同时把窗口期缩短到三周[7]。在本课题中，是对血液标本使用两种不同厂家的第四代试剂进行两次检测，经核酸检测技术对两次酶联免疫吸附法检测均呈阴性的样本再次进行筛查，结果表示筛查出了人类免疫缺陷病毒阳性、乙型肝炎病毒阳性的标本。说明：在临床用血的酶联免疫吸附法检测中，仍存在一定安全隐患，需开展核酸检测来确保临床用血安全[8]。

在感染者血液标本中，最早被检测出来的是病毒核酸，且呈一过性的高水平，之后水平有所下降。于本课题中，在第19个循环时CH1探针就有靶标核酸片段检出，明显提前于在第30.3个循环时内置控在扩增曲线开始抬头，所以推断同内置控病毒载量水平相比，其水平是相当高的，但经酶联免疫吸附法并未检测出免疫球蛋白M抗体、免疫球蛋白G抗体、P24抗原等，说明该样本很可能是处于最早期感染阶段，病毒核酸一过性高水平，刚好P24抗原水平下降但抗体未升高或者P24抗原未出現而导致漏检[9]。同第四代酶联免疫吸附法试剂比较来说，核酸检测技术把窗口期缩短了五天，证实缩短窗口期可确保输血安全[10]。

总之，血液标本即便是经两次酶联免疫吸附法检测时，仍存在漏检人类免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒的风险，应用核酸检测技术可有效筛查出漏检人类免疫缺陷病毒、乙型肝炎病的标本，而进一步确保用血质量、安全。

参考文献：

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[10] 王燕. 核酸检测技术在酶联免疫吸附法漏检HIV和HBV血样筛查中的应用[J]. 中国农村卫生， 2016，25（6）： 44-45.

作者简介：崔永利（1977.01-）， 男， 汉族，山东淄博人，淄博市中心血站，主管技师。E_mail：CYL0533@126.com