易蓉鑫，杨齐之贤，梁易晓，周祖灵，孙永科，杨玉艾

(云南农业大学动物医学院，云南昆明 650000)

良好的细胞培养技术是成功培养细胞的前提，目前细胞培养是现代生物科学中发展得十分迅速的一项重要实验技术，也是研究病毒与研制疫苗等生物产品的基础技术[1-3]。

人胚肾293细胞(HEK-293细胞)是最常用于包装及扩增腺病毒载体的工具细胞，在细胞培养中，支原体污染是最常见、不易察觉和干扰试验结果的污染物，对后续的科研和生产极其不利[4]。据调查，实验室中30%～60%的细胞株都被支原体污染过，是细胞培养，特别是传代细胞的培养中的严重问题，其污染来源主要是操作者及小牛血清。支原体的检测及清除方法虽然众多，但比较复杂费时，且难以清除干净，本研究采用PCR及DNA荧光染色法检测支原体污染，目的是应用大环内酯类和四环素类2种药物有效地清除支原体污染，为更好地展开细胞研究奠定基础[5-8]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞和犊牛血清 试验中所用细胞为云南农业大学细胞保存中心存有的HEK-293细胞及其传代细胞；胎牛血清由美国BI公司生产。

1.1.2 主要试剂 细胞培养液(DMEM，High Glucose)和胰酶、细胞冻存液、大环内酯类抗生素TransMyco-1和四环素类衍生物TransMyco-2(Lot#N10923)、支原体检测试剂盒(TransDetect PCR Mycoplasma Detection Kit)，Transgen公司产品；二甲基亚砜(DMSO),华美生物工程公司产品；四甲基偶氮唑盐(MTT)，美国Sigma公司产品。

1.1.3 主要仪器设备 倒置相差显微镜，明美光电有限公司产品；CO2恒温培养箱，美墨尔特贸易有限公司产品； PCR仪，东胜国际贸易有限公司产品；……