郭笑逸 丛天生 赵春雨 杜航 白雪

（长春圣金诺生物制药有限公司 吉林长春 130000）

1 前言

吐温80是药物制剂常用辅料，其化学名为聚氧乙烯20山梨醇酐单油酸酯，为淡黄色至橙黄色粘稠液体。相比其他辅料，其分子结构中碳链结构较长，在水、乙醇、甲醇中易溶，在亲脂性药物中可发挥良好的增溶作用，故在制备难溶性药物制剂时，常将吐温80作为增溶剂、乳化剂及稳定剂[1]。虽然吐温80在制备生物制品制剂时可发挥重要作用，但如果使用过量，则可导致生物制品制剂使用者发生呼吸困难、恶心呕吐、皮疹等不良反应，对使用者的健康造成严重威胁。《中国生物制品规程（2000年版）》中明确规定[2]，无论何种生物制品制剂，其产品中吐温80含量不应高于100μg/mL，因以此作为标准，针对生物制品制剂行吐温80含量检测，加强生物制品制剂质量控制，确保使用者身体健康。本文采用SEC-ELSD对蛋白重组类生物制品制剂中吐温80含量进行检测。

2 材料与方法

2.1 试剂与仪器

试剂：本次研究选用试剂包括吐温80对照品、乙腈、乙酸、超纯水。

仪器：本次研究选用仪器包括高效液相色谱仪（型号Primaide，日本日立公司）；自动微量分析天平（型号BM-20，日本A&D公司）；四元梯度泵（型号1260 Infinity，美国安捷伦公司）；自动进样器（型号AS-2920，郑州克莱科特仪器有限公司）；柱温箱（FCD-230，北京金时速仪器设备有限公司）；蒸发光散射检测器（型号UM5000，深圳市亿鑫仪器设备有限公司）。

2.2 检测方法的建立

2.2.1 确定色谱条件

色谱柱选用TSKgel G2000SWXL（7.8 mm×30 cm，5μm）；

（1）为明确乙腈与乙酸（0.02 mol/L）比例构成流动相对分离效果的影响，对比分析乙腈与乙酸比例分别为3∶7、2∶8及1∶9情况下的分离效果，结果显示当乙腈与乙酸比例为1∶9时，分离效果最好，最终将流动相中乙腈与乙酸比例定为1∶9。……