溶藻弧菌去乙酰化酶基因cobB克隆及其功能验证
2021-09-14范晨龙丁燏
范晨龙 丁燏
(广东海洋大学水产学院,湛江 524000)
溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是一种嗜盐且嗜温型的革兰氏阴性细菌,可引起鱼、虾、贝等养殖动物鳍间组织溃烂、表皮出血、肾脏发白、肝胰脏肿大充血等病变。同时,在养殖环日益恶化的条件下,养殖动物的弧菌病一旦爆发就会引起养殖动物的大面积死亡[1]。
翻 译 后 修 饰(post-translational modification,PTM)是一种生物化学机制,其中蛋白质中的氨基酸残基被共价修饰。目前,已鉴定出200多种不同类型的PTM[2],其中研究最多的赖氨酸酰化修饰 是乙酰化。乙酰化可以被蛋白质乙酰基转移酶和脱乙酰基酶可逆地催化。赖氨酸的乙酰化首先在组蛋白上鉴定[3]。此后,更多的真核非组蛋白被鉴定为乙酰化,它们参与代谢,细胞周期,衰老,生长,血管生成和癌症[4-9]。相反,原核生物中的乙酰化研究较少,有限的研究主要集中在少数微生物物种上。
Sirtuins是NAD dependent依赖性蛋白脱乙酰基酶,广泛存在于细菌,古细菌和真核生物之中[10],CobB是一种的细菌Sir2同源物。最初发现该蛋白与鼠伤寒沙门氏菌LT2中的尿素合成有关,并部分补偿了磷酸核糖基转移酶CobT的失活[11]。随后的研究表明CobB和酵母Sir2相似具有弱NAD依赖性的ADP-核糖基转移酶活性[12-13]。之后,在其他细菌中发现了它的同源物,包括大肠杆菌[14],枯草芽孢杆菌[15],红假单胞菌[16]和天蓝色链霉菌[17]。研究表明这些酶具有强大的NAD依赖性的组蛋白/蛋白质脱乙酰基酶活性。在肠沙门氏菌中,CobB通过特异性水解Acs活性位点的乙酰赖氨酸中的乙酰基来增强其活性,从而激活了乙酰辅酶A合成酶 (Acs)[18]。……
