葡萄AKR基因家族的鉴定和组织特异性表达分析
2021-09-14马亚男卢旭魏云春李康魏若男李胜马绍英
马亚男 卢旭 魏云春 李康 魏若男 李胜 马绍英
(1. 甘肃农业大学生命科学技术学院,兰州 730070;2. 甘肃农业大学园艺学院,兰州 730070;3. 甘肃农业大学基础实验教学中心, 兰州 730070)
在植物的生长发育过程中,不可避免地会遇到生物或非生物胁迫的影响,例如,土壤盐碱含量过高、极端温度、干旱和病虫害等[1-2]。研究表明,非生物胁迫下植物体内活性乙醛和活性氧(ROS)的水平会提高并导致植物受到损伤。为抵御不良环境植物会产生大量氧化还原酶,将ROS、活性乙醛等有毒物质分解为毒性较小的乙醇与碳水化合物,其中醛酮还原酶(AKR)家族发挥着重要作用[3]。
AKR是氧化还原酶中的组成部分,属于单体胞质蛋白,并以NADP(H)为辅酶氧化还原羧基底物,在生物体中起着核心作用[4-5]。目前关于AKR催化机制的研究的已有较多报道[6-7]。AKR家族成员均以NADPH作为辅酶,由具有相似的三维结构和还原羰基基团的蛋白酶组成[8-9]。AKR催化反应时,辅酶NADPH首先结合到AKR上,接着底物再结合至AKR上。催化反应结束后,产物首先释放,然后氧化态辅酶再释放出来。其催化底物主要有脂肪族和芳香族,而芳香族又分为单糖、酮基、醛基、类固醇等[4-5]。AKR在结构上约有320个氨基酸残基,约35 kD的长度,在进化中具有高度保守性。ARK保守结构域是经典的(α/β)8桶状折叠结构,特异性主要由(α /β)8桶状结构羧基端的3个环(LooP A、LooP B、LooP C)的不同组成和大小决定[10]。AKR催化活性位点是由 N 末端催化四联体(Asp50、Tyr55、Lys84)所构成[10]。该催化四联体被认为是AKR负责底物催化的关键氨基酸[11]。另有研究发现,C末端形成的高度保守的氨基酸残基(Ser271、Arg276)在辅基结合过程中起重要作用[10]。……
